Он содержит такие биологически активные вещества, как флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты, дубильные вещества и углеводы. Настои и отвары из вербейника точечного применяют при желудочно-кишечных нарушениях, воспалениях кожи, молочнице, заболеваниях легких и мигрени [6].
Обзор литературы показал, что сведений о химическом составе вербейника точечного недостаточно, и не применяется в практических целях. За счет привлекательного внешнего вида и неприхотливости это растение часто используется в ландшафтном дизайне для оформления клумб, альпийских горок.
Исходя из вышеизложенного, целью работы явился предварительный хроматографический анализ отдельных фракций, полученных из травы вербейника точечного и исследование полисахаридов в оставшемся шроте.
Исходное сырье экстрагировали 95%, 70%, 40% спиртом этиловым. Предварительную оценку полифенольных соединений осуществляли хроматографически с применением качественных реакций с ионизирующими и комплексообразующими добавками.
. Была проведена характерная качественная реакция на флавоноиды –цианидиновая проба или проба Синода. В результате проведенной реакции обнаружено красное окрашивание [5].
Полученные из сырья спиртовые, спиртоводные извлечения использовали для бумажной хроматографии в системе растворителей н-бутанол – уксусная кислота – вода (4:1:5) и 15% уксусная кислота. Обнаружение компонентов на хроматограмме осуществляли просматриванием их в УФ свете. Следует отметить, что наибольшее разделение компонентов данного извлечения наблюдается в системе БУВ (4:1:5), по сравнению с 15% уксусной кислотой, где зоны адсорбции размыты [1, 3].
После просматривания в УФ свете хроматограммы обрабатывали 5 % спиртовым раствором AlCl3. При этом наблюдали изменение пятен в видимом свете и в УФ-свете.
Предварительный хроматографический анализ свидетельствует о том, что наибольшее количество полифенольных соединений наблюдается в извлечении, полученном спиртом этиловым 40%. Поэтому в последующих наших исследованиях использовали в качестве экстрагента спирт этиловый 40%.
Полученное извлечение последовательно обрабатывали хлороформом, диэтиловым эфиром, этилацетатом, н-бутанолом. Провели хроматографирование четырех фракций, в качестве подвижной фазы использовали БУВ (4:1:5) [5]. Сравнительный анализ четырех фракций представлен в таблице 1.
Таблица 1 – Предварительный хроматографический анализ полученных фракций
Исследуемые фракции |
Значение коэффи- циентов подвижности |
До обработки (видимый свет) |
До обработки (УФ свет) |
После обработки AlCl3 (видимый свет) |
После обработки AlCl3 (УФ свет) |
Окраска зон адсорбции |
|||||
Хлороформное извлечение |
0,46; 0,15. |
1)бесцветная; 2)светло-желтая. |
1) синяя; 2)темно-бурая. |
1)светло-зеленая; 2)светло-желтая. |
1)ярко синяя; 2)светло-желтая. |
Эфирное извлечение |
1) 0,65; 2) 0,50; 3) 0,22; 4) 0,08. |
1)бесцветная: 2,3) светло-оранжевая; 4)желтая. |
1)фиолетовая; 2,3) темно-бурая; 4)желтая. |
1)светло-желтая; 2-4)желтая. |
1)ярко голубая; 2-4)ярко желтая. |
Этилацетатное извлечение |
1) 0,64; 2) 0,51; 3) 0,24. |
1)желтая; 2,3) оранжевая. |
1)желтая; 2,3)темно-бурая. |
1)светло-желтая; 2,3)желтая. |
1) ярко желтая; 2,3)желтая. |
Бутанольное извлечение |
0,63; 0,42; 0,32; 0,26; 0,21. |
1-4)светло-желтая; 5)светло-оранжевая. |
1-4)темно-бурая; 5)желтая. |
1-4)ярко желтая; 4)желтая. |
1-3)желто-коричневая; 4,5)ярко-желтая. |
40% спиртовое извлечение из вербейника |
0,352; 0,475; 0,565; 0,654; 0,775. |
1-2) оранжевая; 3-5) бесцветная. |
1)темно-бурая; 2,4)бурая; 3,5)синяя. |
1)светло-коричневая; 2,4)желтая; 3,5)светло-желтая. |
1,2,4)ярко желтая; 3,5)голубая. |
Результатом фракционирования явилось разделение извлечения, полученного из травы вербейника точечного 40% спиртом этиловым. Полученные фракции характеризуются минимальным содержанием соединений полифенольной природы. В дальнейших наших работах мы проведем идентификацию каждой зоны адсорбции.
При использовании 40% спирта этилового в качестве экстрагента в шроте остаются полисахариды, которые обладают способностью связывать и выводить из организма радионуклиды и тяжелые металлы [2].
Оставшийся шрот исследовали на содержание полисахаридов. При выделении полисахаридов использовали метод Н.К. Кочеткова и M. Sinner [2]. Были выделены четыре фракции: водорастворимые полисахариды (ВРПС), пектиновые вещества (ПВ), гемицеллюлоза А (Гц А) и гемицеллюлоза Б (Гц Б). Количественное содержание данных фракций определяли гравиметрическим методом [2, 4].
Полученные фракции подвергали кислотному гидролизу. Хроматографически с использованием стандартных образцов определяли моносахаридный состав [2]. Результаты по изучению полисахаридного комплекса, представлены в таблице 2.
Таблица 2 – Сведения о полученных полисахаридных фракциях из шрота травы вербейника точечного (Lysimachia punctata L.)
Фракции |
Выход фракций, % |
Моносахариды после гидролиза |
Внешний вид фракций |
ВРПС |
1,56 |
галактоза, арабиноза |
Кристаллический порошок коричневого цвета, с характерным запахом, кисловатого вкуса, растворим в воде |
ПВ |
10,67 |
галактоза, галактуроновая кислота, арабиноза, рамноза |
Кристаллический порошок бледно-коричневого цвета, сладковатого вкуса, без запаха, растворим в воде |
Гц А |
2,73 |
галактоза, арабиноза |
Темно-коричневатый порошок, без запаха, кисловатого вкуса, не растворим в воде |
Гц Б |
3,89 |
Гравиметрический анализ указывает на преобладание пектиновых веществ в траве вербейника точечного. Фракция ПВ представлена галактозой, галактуроновой кислотой, арабинозой и рамнозой
Выводы
В результате работы был проведен предварительный хроматографический анализ полифенольных соединений, выделены четыре фракции полисахаридного комплекса. Гравиметрически определили преобладание пектиновых веществ.
Литература
Бандюкова, В.А. Методы исследования природных флавоноидов / В.А. Бандюкова, А.Л. Шинкаренко, А.Л. Казаков. – Пятигорск: Изд-во Бальнеол. ин-т, 1977. – 72 с.
Кочетков, Н.К. Химия биологически активных соединений / Н.К. Кочетков.– М., 1970.– 486 с.
Определение биологически активных соединений фенольной и полифенольной природы в различных объектах методами хроматографии / М.В. Кочетова [и др.] // Успехи химии.- 2007.– Т.76, №1.– С.88-100.
Пеливанова, С.Л. Полисахариды крыжовника отклоненного (Grossularia reclinata (L.) Mill.) / С.Л. Пеливанова [и др.] // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. – Пятигорск, 2013. – Вып. 68. - С. 76-77.
Природные флавоноиды / Д.Ю. Корулькин [и др.]. – Новосибирск: Гео, 2007. – 232 с.
http://cveti-rasteniya.ru/verbejnik-tochechnyj.html