IX Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2017

Метод полимеразной цепной реакции основан на ферментативной амплификации выбранных специфических участков генома бактерий рода Mycobacterium tuberculosis, M. bovis, M. africanum, M. microti, их дальнейшей детекции и идентификации. Аналитическая чувствительность метода очень высока и составляет 1-10 бактериальных клеток. ПЦР можно использовать не только для обнаружения генетического материала возбудителя туберкулеза, но и для определения резистентности этого штамма к противотуберкулезным препаратам. Возрастающее число мультирезистентных штаммов M. tuberculosis представляет собой серьезную проблему для современного здравоохранения. Лечение пациентов, инфицированных мультирезистентными штаммами, требует применения более токсичных и дорогостоящих химиопрепаратов, длительной госпитализации и, тем не менее, часто остается неэффективным, обуславливая высокий удельный вес инвалидизации и смертности. Кроме того регистрируют заболевания, вызванные нетуберкулезными микобактериями (микобактериозы) со сходной с туберкулезом клинико-рентгенологической картиной. Вследствие этого больные микобактериозоми получают не показанные им химиопрепараты, к которым потенциально патогенные микобактерии имеют резистентность. Основным в решении этой проблемы является своевременная детекция мультирезистентных штаммов на ранних стадиях заболевания, которая позволит контролировать дальнейшее распространение конкретного выявленного штамма и подобрать оптимальную схему химиотерапии.[2,4]. Исследования показывают наличие множественной лекарственной устойчивости, устойчивости МБТ к двум основным противотуберкулезным препаратам – изониазиду и рифампицину одновременно (независимо от наличия резистентности к другим препаратам). Регистрируется и экстенсивная или широкая лекарственная устойчивость – множественная лекарственная устойчивость в сочетании с устойчивостью к фторхинолонам и к одному из группы инъекционных препаратов: канамицину, амикацину, капреомицину. Лечение при таком виде устойчивости туберкулеза крайне трудно.[3]. Определяют также экстремальную или абсолютную лекарственную устойчивость – устойчивость ко всем противотуберкулезным препаратам. Выявляют и такое явление, как перекрестная лекарственная устойчивость, при которой возникновение устойчивости к одному препарату влечет за собой устойчивость к другим. Она обусловлена сходством химической структуры некоторых противотуберкулезных препаратов.

Показано, что у 90-98% устойчивых штаммов резистентность связана с мутациями в гене rpoB, который кодирует бета-субъединицу ДНК-зависимой РНК-полимеразы . 95-98% Мутаций в rpoB расположено в коротком участке 81 пн, при этом более 85% мутаций выявлено в трех кодонах 516, 526, 531. Применяемые в настоящее время многочисленные методы для определения мутаций в rpoB либо определяют факт их наличия, либо выявляют конкретные мутации, и при этом золотым стандартом остается прямое секвенирование ДНК. При отсутствии мутаций в данном кодоне происходит кодон - зависимая аллель - специфическая амплификация фрагмента гена rpoB, наличие мутации в позиции, соответствующей 3'-концу праймера, ведет к неспариванию праймера и матрицы и неспособности полимеразы к синтезу комплементарного фрагмента. Таким образом, наличие мутации приводит к отсутствию индикаторного фрагмента. Одновременно проводится три реакции ПЦР, направленные на все три кодона: 516, 526, 531.[1]

Проводимые исследования показывают многообразие механизмов резистентности микобактерий к химиопрепаратам и особую ценность молекулярно-генетических методов для определения этого явления.

Список литературы

1. Бочкарев Е.Г., Денисова Т.С., Генерозов Э.В., Говорун В.М., Никитченко Е.Ю., Черноусова Л.Н., Кузнецов П.В. Генодиагностика во фтизиатрии-М. 2000г. - С.1-15

2. Баженов И.Л., Канина А.О., Тукачёва О.В., Быкова Л.П., Годовалов А.П. Анализ заболеваемости туберкулезом среди ВИЧ-инфицированных города Краснокамска // Успехи современного естествознания. – 2011. – № 8. – С. 91-92

3. О санитарно-эпидемиологической обстановке в Российской Федерации в 2009 году. Государственный доклад. – M.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2010. – С. 456.

4. Струков Л.А, Парфенов И.А. Своевременная диагностика устойчивости к антибиотикам методом ПЦР /ООО НПФ «Литех», М//XVIII Всероссийская научно-практическая конференция «Аналитическая надежность и диагностическая значимость лабораторной медицины» - М.: 2013г. – С. 1-21

Код для цитирования: Скопировать