VII Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2015

Контаминация пищевого сырья и продуктов питания патогенными энтеробактериями и бациллами на этапах технологического процесса – это серьезная проблема не только переработчиков, но и медиков. Пищевые отравления, вызванные бактериями родов и видов Bacillusmesentericus, Bacilluscereus, Bacillussubtilis, Bacillusmegaterium, Bacillusmycoides, Bacilluspolymyxa, Morganella, E. coli, Salmonella, Y. еnterocolitica, Proteus, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, частохарактеризуются острым течением болезни и могут вызвать летальный исход. В настоящее время дезинфекция на перерабатывающих предприятиях осуществляется при помощи разрешенных дезинфицирующих средств. Обладая рядом ценных качеств (малая токсикологическая и эколого-гигиеническая опасность, наличие моющих свойств, бактерицидная эффективность в отношении широкого спектра грамположительных и грамотрицательных бактерий и др.), такие дезинфекционные средства характеризуются недостаточной бактерицидной активностью. Задача изыскания эффективного и безвредного способа дезинфекции – актуальная тема для исследований, результаты которых позволят повысить эффективность применения контрольных мер на перерабатывающих предприятиях мясной, молочной, рыбной и др. продукции, а также сделать данные исследования значительно дешевле.

Разработка экспериментального биопрепарата, применение которого в качестве дезинфектанта по разработанной нами технологии, позволит быстро и качественно инактивировать неспецифическую микрофлору производственных помещений, инвентаря и оборудования. Применение данного фагового биопрепарата способствует быстрой и качественной инактивировации энтеробактерий и бацилл, контаминирующих сырье и продукты питания на всех этапах технологического цикла.

Данная цель достигается выполнением одной из следующих задач: изучить действие экспериментального биопрепарата в качестве дезинфектанта на энтеробактерии родов Proteus, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, циркулирующие на перерабатывающих предприятиях мясной, молочной, рыбной, зерномучной и т.п. продукции.

Материалы и методы исследований

Питательные среды и реактивы. Для бактериологического исследования использовали питательные среды: мясопептонный бульон, мясо-пептонный агар, среда Симонса, среда Клиглера, среда Гисса с маннитом, среда Гисса с лактозой, среда Гисса с сахарозой, среда Гисса с мальтозой, среда Гисса с глюкозой, среда Плоскирева (НПО «Питательные среды», г. Махачкала); среда Эндо (ГНЦ прикладной микробиологии, г. Оболенск); висмут-сульфит агар («Биотехновация», г. Москва). Реактивы: трихлорметан ТУ 6-09-4263-76 (СКТБ «Технолог»), мочевина, дрожжевой экстракт сухой, натрий хлор, натрий гидрофосфат, L - фенилаланин, пептон, калий дигидрофосфат, глюкоза, феноловый красный, метиловый красный, α - нафтол, калий гидроокись, пара - диметиламинобензальдегид, кислота хлористоводородная («HiMedia», Индия); спирт этиловый 96%; раствор Люголя; фуксин Циля; 0,04% спиртовый раствор генцианвиолета; экспериментальный биопрепарат на основе фагов «УНИФАГ»

Методы. Бактериостатическую и бактерицидную концентрации биопрепарата на основе фагов «УНИФАГ» определяли методом их серийных разведений согласно нормативно-технической документации [1-4].

Штаммы бактерии родов Proteus, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, циркулирующие на перерабатывающих предприятиях мясной, молочной, рыбной, зерномучной и т.п. продукции, которые хранились в условиях бытового холодильника на скошенном мясо-пептонном агаре в течение 1 месяца.

Результаты собственных исследований

Первым этапом наших исследований было выделение и изучение биологических свойств бактерий, циркулирующих на перерабатывающих предприятиях мясной, молочной, рыбной, зерномучной и т.п. продукции. Проверка выделенных культурProteus, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiellaпо культуральным и биохимическим свойствам проводилась с использованием следующего методического обеспечения - «Методические указания по бактериологической диагностике смешанной кишечной инфекции молодняка животных, вызываемой патогенными энтеробактериями», утвержденными Департаментом ветеринарии МСХ и П РФ 11.10.1999 г.

По результатам исследований установлено, что все полученные штаммы: 25 штаммов бактерий рода Proteus, 14 – рода Citrobacter, 10 – Enterobacter, 16 –Klebsiella.

Биомассу энтеробактерий (выделенных культурProteus, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella)нарабатывали на жидкой питательной среде: мясопептонном бульоне. В дальнейшем биомассу трехкратно центрифугировали, освобождая от питательной среды, и концентрировали до 10¹⁰м.к./мл. В полученную бактериальную суспензию добавляли «УНИФАГ» с учетом его конечного содержания 10 мгмл. Данная концентрация была выбрана эмпирическим путем.

Ранее были проведены соответствующие исследования по изучению концентраций «УНИФАГА» 1; 2,5; 5; 7,5 мг/мл по вышеуказанной методике. Результаты исследований показали, что препарат в вышеобозначенных концентрациях оказывал явно выраженное бактерицидное действие на бактерии родов Proteus, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella.

Бактериостатическое действие «УНИФАГА» на бактерии родов Proteus, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella проверяли методом контрольного высева бактериальных культур, взаимодействующих с препаратом, в различные промежутки времени (от 1 до 5 часов с интервалом в 30 минут) без освобождения их от буферного раствора, содержащего препарат.

Бактерицидную активность «УНИФАГА» также определяли методом контрольного высева бактериальной суспензии, но после освобождения ее от «УНИФАГА» дифференциальным центрифугированием получали осадок бактерий. Надосадок, с содержащимся в нем «УНИФАГОМ», удаляли, а осадок ресуспендировали в чистом буфере и, после часовой экспозиции, высевали на твердые питательные среды. Отсутствие бактериального роста в течение 5 суток (срок наблюдения) означало, что данная доза препарата при используемой экспозиции обладает бактериостатическим или бактерицидным действием.

Заключение

Анализ полученных данных свидетельствует о том, что экспериментальный биопрепарат «УНИФАГ» обладает бактерицидным действием на бактерии родов Proteus, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, циркулирующие на перерабатывающих предприятиях мясной, молочной, рыбной, зерномучной и т.п. продукции.

Библиографический список

1. Методические указания по отбору, испытаниям и оценке антивирусных и антибактериальных химиопрепаратов среди соединений различных химических классов - Покров, 2002.

2. Методические указания по определению чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. МУК 4.2.1890-04.

3. Методические рекомендации по проведению бактериологических исследований при пищевых отравлениях - М., 1990, 7 с. Утв. Глав, управл. эпидемиол. и гиг. МЗ РСФСР 17.08.90г.

4. Инструкция о порядке расследования, учета и проведения лабораторных исследований в учреждениях санитарно-эпидемиологической службы при пищевых отравлениях. - М., 1975. Утв. МЗ СССР от 20.12.73, № 1135-73.

Код для цитирования: Скопировать