VII Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2015

В современном мире в связи с удлинением жизни и улучшением ее качества проблема амилоидоза становится все более актуальной, поскольку увеличивается общее число больных, страдающих хроническими воспалительными заболеваниями, и людей с наследственными формами амилоидоза. Установлено, что амилоидоз сердца обнаруживается у 2,3 % умерших в возрасте до 50 лет, в возрастной группе 50-70 лет его выявляют у 30 %, в группе 70-80 лет – уже у 41 %, а у лиц, умерших в возрасте старше 90 лет, амилоидоз миокарда обнаруживали в 7190 % случаев [Козловская Л. В., Рамеев В. В., Саркисова И. А. Амилоидоз у пожилых // Клиническая медицина : Научно-практический журнал. – 2005. – Т. 83, N 6. – С. 12–20. – ISSN 0023-2149]. В то же время, теории, удовлетворительно объясняющей все патогенетические феномены, свойственные различным формам амилоидогенеза и одновременно позволяющей прогнозировать эффективность средств лечения и профилактики этой патологии – нет.

Все известные нам способы получения экспериментального системного амилоидоза предполагают в качестве экспериментальных животных использование старых животных мышей, крыс или морских свинок, поскольку именно старческая брадитрофия тканей позволяет осуществить моделировании амилоидоза. На молодых крысах амилоидоз с использованием известных способов не воспроизводится вследствие особенностей обмена веществ. Однако использование старых животных не позволяет проводить долгосрочный фармакологический эксперимент по лечению и профилактике амилоидоза. Продолжительность пребывания старых животных в каком-либо эксперименте резко ограничена преклонным возрастом.

В связи с вышесказанным, целью нашего исследования является разработка собственных экспериментальных моделей амилоидоза, воспроизводимых на молодых животных.

Материал и методы.

В эксперименте были использованы шестнадцать белых лабораторных половозрелых 35-дневных мышей-самцов массой 28,5±1,2 г, содержавшихся на стандартном рационе вивария. Случайным образом мыши были разделены на три группы по три мыши в первой и второй группах и четыре мыши в третьей группе: 1) контрольная группа, 2) группа, в течение 30-ти дней получали подкожно через день 0,5 мл смеси цельного молока, содержащей 30% сырого яичного альбумина, 15 инъекций, 3) группа, получали подкожно ежедневно в течение 30ти дней яичный альбумин по 0,5 мл вместе со взвесью дигидрокверцетина в 3% растворе крахмального клейстера из расчета 1,5 мг/кг массы per os. Все мыши в течение всего времени эксперимента находились в одной клетке. Доступ к воде и корму был свободный.

По окончании введения белковых препаратов мыши были декапитированы. Органы: печень, левая почка, селезенка, – изъяты, измерены миллиметровой лентой, взвешены на электронных аналитических весах и зафиксированы 10% нейтральным формалином. После формалиновой фиксации органы были отмыты проточной водой, проведены через батарею спиртов восходящей крепости для обезвоживания и залиты парафином.

Из парафиновых заливок были приготовлены срезы толщиной 5 мкм, которые монтировали на предметных стеклах, после чего депарафинировали и окрашивали 1% раствором красного конго для выявления амилоида и докрашивали гематоксилином. Срезы микроскопировали в проходящем свете на микроскопе Лейка с последующей видеофиксацией микрофотографией в цифровом виде, а также на поляризационном микроскопе МИН-8.

Результаты исследования.

Контрольная группа – форма, линейные размеры, цвет и консистенция органов интактных животных были в пределах возрастной нормы, каких-либо патологических изменений, вызванных болезнями лабораторных животных, не выявлено. Капсула почки снимается легко. Данные о влажной массе изъятых органов представлены в таблице.

На срезах почки диаметр клубочка составлял около 50-70 мкм. Нефротелий был представлен клетками, приближающимися к кубическому эпителию с округлыми ядрами и цитоплазмой, прокрашивающейся в кирпичный цвет. По количеству ядер в петлях капилляров клубочка определялось от 45 до 60 клеток и примерно столько же эритроцитов. Наблюдается картина нефрита. Канальцевый эпителий не имел морфологических отклонений и соответствовал гистологической норме. Отдельные сегменты клубочка представлены гомогенными конго-положительными депозитами, не содержащими ядер, которые сдавливали петли капилляров, о чем свидетельствуют ядра овальной или уплощенной формы. Выявлялись единичные эритроциты. Просветы канальцев несколько сужены, имели фестончатое строение, содержали зернистые массы. Цитоплазма канальцевого эпителия была мелкозернистая, со слабой конго-положительной реакцией.

Большая часть препаратов селезенки представлена белой пульпой, состоящей из лимфоидных фолликулов. Красная пульпа представлена ретикулярной стромой и эритроцитами. Морфологический паттерн соответствует гистологической норме.

Паренхима печени имела вид булыжной мостовой (вымывание гликогена в процессе подготовки срезов к окраске) – нормальная гистологическая картина. Цитоплазма клеток светооптически пустая, содержала мелкие зерна. Морфологический паттерн соответствует гистологической норме.

Вторая группа – визуально форма, линейные размеры и цвет печени животных этой группы не отличались от интактных, однако консистенция печени была более плотная, чем у интактных мышей, на срезе печень выглядела как сальная. Внешних различий формы, консистенции, цвета и линейных размеров почек в этой группе не наблюдалось. Капсула почки снимается легко. Селезенка была резко увеличена во всех размерах до 2,0±0,1 см в длину, 0,4±0,1 см в ширину и толщину в направлении от широкой части к селезеночной связке, в контроле 1,5±0,1×0,3±0,1×0,1±0,05 см, соответственно, консистенция плотная.

Лимфоидные фолликулы селезенки либо циркулярно окружены амилоидом, во многих фолликулах лимфоидная ткань замещена амилоидом с разной степенью выраженности. Красная пульпа практически отсутствует. Отмечается присутствие большого количества мегакариоцитов на разных стадиях формирования. Выявляются единичные указанные клетки с патологическим митозами, заключающимися в дехроматизации и рассеянии ядерного материала на два полюса клетки неравномерно (показано стрелкой).

Цитоплазма гепатоцитов при окраске конго красным мелко-вакуолизирована. Амилоид-положительное вещество выявлялось только в строме портальных трактов и стенках сосудов.

Таблица

Влажная масса изъятых органов, г

Орган	1) группа, контрольная	2) группа, взвесь 30% яичного альбумина в цельном молоке	3) группа, взвесь 30% яичного альбумина с дигидрокверцетином per os
Печень	4,14±0,1	5,2±0,1 р=0,002	5,4±0,1 р=0,002
Почка	1,2±0,03	1,4±0,02 р=0,003	1,4±0,01 р=0,003
Селезенка	0,8±0,015	2,1±0,04 р=0,000	2,0±0,034 р=0,000

Примечание: значения р приведены по отношению к интактной группе.

У мышей, получавших на фоне введения яичного альбумина дигидрокверцетин в дозе 1,5 мг/кг массы, морфологическая картина гистологических препаратов почки, печени и селезенки не отличалась от описанной выше модели с введением 30% взвеси яичного альбумина в цельном молоке. В связи с чем, полученные микрофотографии в данном отчете мы не приводим. Очевидно, что дигидрокверцетин в примененной дозе не повлиял на формирование амилоидной модели.

Таким образом, предлагаемые нами способы вызывают развитие системного амилоидоза у молодых мышей двухмесячного возраста. Данное обстоятельство позволяет проводить долгосрочный фармакологический эксперимент по лечению и профилактике амилоидоза.

Исходя из полученных результатов исследования можно сделать ряд выводов:

1. Разработанные нами модель амилоидоза хорошо воспроизводимы и может быть использована для экспериментального применения;

2. Использование дигидроквертицина не предотвращает развитие и отложение амилоида в паренхиматозных органах.

Список литературы

1. Козловская Л. В., Рамеев В. В., Саркисова И. А. Амилоидоз у пожилых // Клиническая медицина : Научно-практический журнал. – 2005. – Т. 83, N 6. – С. 12–20. – ISSN 0023-2149

2. Chiu K., So K.-F., Chuen-Chung Chang R. Progressive Neurodegeneration of Retina in Alzheimer’s Disease – Are β-Amyloid Peptide and Tau New Pathological Factors in Glaucoma? // Glaucoma. Basic and Clinical Aspects. – 2013. Rumelt Sh. (Ed.), аvailable from: http://www.intechopen.com/books/glauco-ma-basic-and-clinical-aspects/progressive-neurodegeneration-of-retina-in-alzhei-mer-s-disease-are-amyloid-peptide-and-tau-new-patho

3. Domagk G. Untersuchungen uber die Bedeutung des reticuloendothelial ystems fur die Entstehung d. Amyloids, Virchows Archiv, B. CCLIII, 1924.

4. Сапожников С.П., Гордова В.С. Роль соединений кремния в развитии аутоиммунных процессов // Микроэлементы в медицине. – 2013. – N 3. – C. 3

5. Грицман А. Ю. Некоторые вопросы экспериментальной терапии амилоидоза и резорбции амилоида: автореф. дисс. ... канд. мед. наук / А. Ю. Грицман; М., 1974. – 24 с.

6. ГОСТ Р 53434-2009 Принципы надлежащей лабораторной практики. – 16 с. (Национальный стандарт Российской Федерации).

7. Капинус Л.Н. Иммуноморфологическое изучение ранних стадий амилоидогенеза. Бюлл. Эксп. Биол. Мед. 1978; 85 (2): 232–234.

8. Domagk G. Untersuchungenuber die Bedeutung des reticuloendothelialystems fur die Entstehung d. Amyloids, VirchowsArchiv, B. CCLIII, 1924.

9. Шварц С.С. Экологические закономерности эволюции. М.: Наука, 1980: 153 c.

10. Черников М. П. Протеолиз и биологическая ценность белков. Казеины как собственно пищевые белки. – М.: Медицина, 1975. – 231 с.

11. Yang X., He C., Li J., Chen H., Ma Q., Sui X., Tian S., Ying M., Zhang Q., Luo Y., Zhuang Z., Liu J.Uptake of silica nanoparticles: Neurotoxicity and Alzheimer-like pathology in human SK-N-SH and mouse neuro2a neuroblastoma cells// Toxicol. Lett. – Vol. 229, N 1. – P. 240–249. doi: 10.1016/j.toxlet.2014.05.009. Epub 2014 May 14.

12. Gagni P., Sola L., Cretich M., Chiari M. Development of a high-sensitivity immunoassay foramyloid-beta 1-42 using asiliconmicroarray platform // Biosens Bioelectron. – Vol. 47. – P. 490–495. doi: 10.1016/j.bios.2013.03.077. Epub 2013 Apr 6.

13. Subash S., Essa M.M., Al-Adawi S., Memon M.A., Manivasagam T., Akbar M. Neuroprotective effects of berry fruits on neurodegenerative diseases // Neural. Regen. Res. – 2014. – Vol. 15, N 9(16). – P. 1557-1566. doi: 10.4103/1673-5374.139483.

Код для цитирования: Скопировать