VI Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2014

Существуют различные мнения по вопросу устойчивости бактерий B.bronchiseptica к факторам окружающей среды и различным химическим средствам. По данным одной группы исследователей,бактерии вне организма чувствительных животных и человека не проявляют высокой устойчивости к факторам внешней среды и быстро разрушаются вне дыхательного тракта или вне фагоцитов, при ультрафиолетовом облучении, при воздействии высокой температуры, снижении уровня рН, воздействии моющих средств или обычных дезинфектантов [6].

По данным других исследователей во влажных, бедных необходимыми для бордетелл питательными веществами субстратах (например, в стоячей воде или фосфатно-буферном растворе) они сохраняют жизнеспособность на протяжении минимум 6-ти месяцев. В зарубежных источниках есть сообщения об установленном факте роста бактерий B.bronchiseptica в соленой воде без добавления каких-либо питательных веществ [7].

По даннымD.A. Bemis (1986) бордетеллы лучше переносят низкие температуры, погибая во влажных субстратах при 56°С в течение 15 мин. Замораживание не уничтожает бактерии B.bronchiseptica. Надежными методами обезвреживания контаминированных бактерией материалов, одежды и других объектов служат автоклавирование (при 121°С в течение 1 ч) и обработка сухим жаром (при 160-170°С в течение 1 ч) [6].

Бактерии B.bronchiseptica неустойчивы ко многим дезинфицирующим средствам – глютаровому альдегиду, 1% раствору гипохлорита натрия, формальдегиду, 70% этиловому спирту, фенолу, йодсодержашим препаратам.

В зарубежных литературных источниках приведены противоречивые сведения о чувствительности бактерий к антибиотикам и химическим средствам, что, по-видимому, связано с различными методиками исследований и многообразием штаммов B.bronchiseptica[6, 7].

Изучение чувствительности штаммов B.bronchiseptica к химическим факторам актуально, так как данные могут быть использованы для подбора селективных компонентов питательных сред, а также для выбора эффективных терапевтических и дезинфицирующих средств [1-3].

В связи с вышесказанным, целью наших исследований явилось изучение устойчивости лабораторных штаммов B.bronchisepticaк некоторым химическим средствам.

Работа выполнялась на базе научно-исследовательского инновационного центра микробиологии и биотехнологии (НИИЦМиБ) ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина».

В работе использовали общепринятые микробиологические методы выделения и типирования бактерий, соответствующие им среды, оборудование и реагенты [4, 5].

Нами были исследованы предельные подавляющие концентрации для роста культур B. bronchiseptica мочевины, хлорида бария, индикаторов и красителей методом серийных десятикратных разведений в бульоне [5].

Результаты исследований представлены в таблице.

Таблица - Предельные концентрации ингибиторов роста и красителей для лабораторных и клинических штаммовB.bronchiseptica

Анализ полученных результатов показывает, что штаммы B.bronchiseptica выдерживают высокие концентрации хлорида бария и мочевины. Так, на качество роста изучаемых штаммов бордетелл не влияют концентрации мочевины в субстрате в количестве 10 г/дм³ и хлорида бария – 10 г/дм³. Мочевина, как и хлорид бария полностью подавляет рост бордетелл в количестве 100 г/дм³ бульона.

В результате исследования предельных концентраций индикаторов и красителей в субстрате для штаммов B.bronchiseptica получили следующие данные: феноловый красный в количестве не более 1 г/дм³; бромтимоловый синий в количестве не более 10 г/дм³; метиловый оранжевый 0,1 г/дм³; фуксин кислый не более 0,1 г/дм³; водный голубой не более 10 г/дм³; бриллиантовый зеленый не более 0,1 г/дм³; конго красный – 100 г/дм³; сафранина не более 0,1 г/дм³; генциан виолет не более 1 г/дм³; мурексид не более 10 г/дм³.

Рост культуры B.bronchiseptica с десятикратных разведений МПБ с бромтимоловым синим показан на рисунке.

Рис. Рост культуры B. bronchiseptica с десятикратных разведений МПБ с бромтимоловым синим на секторах МПА через 48 - 72 часа: 1 –рост единичных колоний, окрашенных в синий цвет, количество бромтимолового синего 100 г/дм³; 2 – рост по штриху, количество бромтимолового синего 10 г/дм³; 3 – рост по штриху, количество бромтимолового синего 1 г/дм³; 4 - рост по штриху, количество бромтимолового синего 0,1 г/дм³; 5 - рост по штриху, количество бромтимолового синего 0,01 г/дм³

Анализ полученных результатов показывает, что штаммы B. bronchiseptica выдерживают высокие концентрации ингибиторов роста, индикаторов и красителей. Эти данные можно использовать при разработке селективно-диагностической среды для определения селективных компонентов и индикаторов рН среды.

Библиографический список:

1.  
   1.  
      1.  

         1. Васильев Д.А. Технология конструирования селективной, транспортной, накопительной сред для Bordetella bronchiseptica / Д.А. Васильев, Ю.Б. Никульшина, Д.Г. Сверкалова, А.В. Мастиленко, Е.Н. Семанин, Д.Н. Хлынов // Труды Международной научно-практической конференции, посвященной 50-летию ВНИИВВиМ «Проблемы профилактики и борьбы с особо опасными, экзотическими и малоизученными инфекционными болезнями животных». - Покров. – 2008. – С. 13-14.

         2. Васильева Ю.Б. Конструирование биопрепаратов для лабораторной диагностики бордетеллёзной инфекции // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - №2 (22). – С. 25-29.

         3. Васильева Ю.Б. Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики бордетеллёза // Современные проблемы науки и образования. – 2013. – № 4; URL: http://www.science-education.ru/110-9751.

         4. Сверкалова Д.Г. Технология конструирования селективной среды для B. bronchiseptica / Д.Г. Сверкалова, Ю.Б. Никульшина (Васильева), Д.Н. Хлынов, Е.Н. Никулина // Материалы II-й Открытой Всероссийской конференции молодых ученых «Молодежь и наука XXI века». – Ульяновск. - 2007. - Ч.1. – С. 219-222.

         5. Лабинская, А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований. М.: Медицина, 2004. – 394с.

         6. Bemis, D.A. (1986) Bordetella. In: Pathogenesis of Bacterial Infections in Animals. Eds C. L. Gyles and С. О. Thoen. Iowa State University Press, Iowa, pp 137-146

         7. Brockmeier, S .L. (1999) Early colonization of the rat upper respiratory tract by temperature modulated B.bronchisеptica. FEMS Microbiol. Lett. 174, 225-229.