V Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2013

Атопический дерматит (АтД) является одной из наиболее распространенных форм аллергического поражения кожи. Показатель распространенности АтД растет во всем мире. Распространенность АтД в детской популяции составляет до 15-30%, во взрослой - до 2-10% [1]. Иммунопатогенез АтД - многоэтапный и сложный процесс, полностью не изученный до настоящего времени и требующий дальнейшего более подробного исследования.

АтД - хроническое воспалительное заболевание кожи, развивающееся по IgE-зависимому механизму, патогенез которого связан с дисбалансом иммунорегуляторных субпопуляций в сторону поляризации Th2 пути и соответствующим изменением их цитокинового профиля.

Исследование цитокинового профиля при АтД позволяет оценить характер воспаления, а также назначить соответствующую противовоспалительную терапию.

Цель работы: Определение профиля цитокинов в бесклеточной фракции экссудата «кожного окна» при атопическом дерматите в разные стадии болезни и в разных участках кожи.

Материал и методы: Концентрация цитокинов определялась в бесклеточных кожных экссудатах, получаемых согласно патенту № 1534395 на изобретение «Способ диагностики аллергического диатеза» В.В. Климова, Т.В. Кошовкиной, В.К. Раткина и А.А. Денисова (1993) и медицинской технологии «Способ оценки минимальной воспалительной активности кожи при атопическом дерматите в стадии ремиссии» ФС №2010/217 (2010) [2,3]. Обследовано 59 больных АтД и 10 здоровых добровольцев. Диагноз АтД устанавливался на основании  данных анамнеза, клинической картины, кожного аллергологического тестирования, содержания IgE. Степень тяжести заболевания устанавливалась с учетом  индекса SCORAD.

Переднюю сторону предплечья дезинфицировали спиртом. Затем в средней трети ладонной поверхности предплечья с помощью стерильного скальпеля удаляли верхний слой эпидермиса, не затрагивая более глубокие слои кожи. Удалив роговой слой на участке кожи площадью 0,5x0,5 см образовывалась поверхность с характерным блеском. Слой шиповатых клеток, базальных клеток и базальная мембрана эпидермиса оставались интактными. На скарифицированный участок помещали камеру объемом 1,0 мл, предварительно заполненную с помощью шприца стерильной средой 199. Камеру фиксировали на коже с помощью лейкопластыря. Круговая обвязка предплечья лейкопластырем обеспечивала наиболее надежную фиксацию камеры.

Через 6 часов камера снималась, ее содержимое пипеткой собиралось и переносилось в пробирку. После центрифугирования экссудата получался супернатант, который в дальнейшем использовался для определения цитокинов.

Для определения продукции IL-4, IL-10, IL-17 и IFN-г были использованы  наборы реагентов «ИЛ-4-ИФА-БЕСТ», «ИЛ-10-ИФА-БЕСТ», «ИЛ-17-ИФА-БЕСТ» и «гамма-ИНТЕРФЕРОН-ИФА-БЕСТ» (ЗАО «Вектор-Бест», г. Новосибирск). Постановку ИФА проводили в соответствии с методическими рекомендациями производителя.

Анализ результатов ИФА проводили на микропланшетном ридере Multiscan EX («Labsystems», Финляндия). Расчет концентрации цитокинов осуществлялся по калибровочной кривой с помощью компьютерной программы. Количество выражали в пикограммах на миллилитр (пг/мл). Статистическая обработка результатов исследования проводилась с помощью пакета статистических программ «SPSS». Для представления количественных данных, не подчиняющихся нормальному закону распределения, использовались описательные статистики: Ме (медиана), Q1 (1-й квартиль (25%)) и Q3 (3-й квартиль (75%)). Для всех имеющихся выборок данных применялись непараметрические критерии Краскал-Уолиса и Манна - Уитни.

Результаты. Как видно из таблицы №1, в периоде ремиссии сохраняется в основном та же направленность в отклонениях в содержании цитокинов, что была отмечена в периоде обострения. Наблюдаются высокие уровни IL-4 и IL-10, при этом снижение IFN-γ в стадию ремиссии даже более значительное и достоверно отличается по отношению к обобщённой группе больных АтД в остром периоде. Эти данные согласуются с литературным источником [4].

Таблица №1

 Содержание IL-4, IFN-g, IL-10 и IL-17 в экссудате «кожного окна» у здоровых лиц и пациентов с АтД в динамике процесса, Ме (Q1-Q3)

Примечания: Ме - медиана, Q1 - первый квартиль, Q3 - третий квартиль, р1 - достоверность различий в сравнении с контрольной группой (р<0,05), р2 - достоверность различий в сравнении с периодом обострения АтД (р<0,05)

Таблица №2

Содержание IL-4, IFN-g, IL-10 и IL-17 в экссудате «кожного окна» у здоровых лиц и пациентов с АтД в зависимости от места установки камеры, Ме (Q1-Q3)

Примечания: Ме - медиана, Q1 - первый квартиль, Q3 - третий квартиль, р1 - достоверность различий в сравнении с контрольной группой (р<0,05), р2 - достоверность различий в сравнении со здоровым участком кожи в периоде ремиссии АтД (р<0,05)

В результате, было установлено, что место установки камеры влияет только на IL-10, содержание которого существенно возрастает в очагах лихенификации по сравнению со здоровыми участками кожи. Это согласуется с особенной ролью IL-10 в аллергических процессах. IL-10 вырабатывается многими видами клеток (Тх2, Tr1, дендритные клетки и др.). По-видимому, многие их них вовлечены в процессы ремоделлирования кожи.

Заключение: Таким образом, в периоде ремиссии АтД отмечается повышение IL-4 и снижение IFN-g - изменения, характерные также для острого периода болезни и отражающие атопический характер патологии с поляризацией в сторону Тх2. В очагах лихенификации по сравнению со здоровыми участками кожи отмечается повышение содержания IL-10, что может свидетельствовать о важной роли этого цитокина в процессах ремоделирования кожи при АтД.

Список литературы:

1.           Atopic Dermatitis / Bernice R Krafchik // eMedicine,  Jan 19, 2010 [Электронный ресурс] - Режим доступа: http://emedicine.medscape.com/article/1049085-overview

2.           Медицинская технология «Способ оценки минимальной воспалительной активности кожи при атопическом дерматите в стадии ремиссии" ФС№2010/217 от 10.06.2010// Климов В.В., Денисов А.А., Фирсова Е.К, Саликова Т.И.,  Загрешенко Д.С.

3.           Пат. 1534395 РФ. Способ диагностики аллергического диатеза / Климов В.В., Кошовкина Т.В., Раткин В.К. и др.; опубл. 10.09.1993.

4.           Ключевые цитокины профиля Th1 и Th2 в кожном экссудате при атопическом дерматите / Д. С. Загрешенко // "Науки  о  человеке" // Сибирский государственный медицинский университет  - Томск, 2007. - 273с.