X Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2018

Цель работы – изучить и установить оптимальное соотношение фаг/бактерия при пассировании коммерческих бактериофагов бактерий рода Listeria.

В работе были использованы существующие коммерческие бактериофаги Listeria - L2А, L4A (ФИЦВИМ, г. Покров, Россия) и P100 (Голландия) и их индикаторные культуры L.monocytogenes - 9-72, L.monocytogenes - 9-127, L.monocytogenes - 10522.

Опытным путем определяли оптимальное соотношение между количеством изучаемого фага и количеством индикаторной культуры во время пассирования [1-21].

При добавлении фаголизата к индикаторной культуре бактерий соотношение между количеством корпускул фага и количеством бактериальных клеток выражают понятием множественности фаговой инфекции. При высокой множественности инфекции лизис культуры может наступать очень быстро, однако нарастание титра фага в таком лизате будет сравнительно небольшим.

Иногда в таком случае на одной бактериальной клетке могут адсорбироваться сотни корпускул фага и, вследствие действия их литического фермента на клеточную стенку, может произойти лизис бактерии извне раньше, чем развернется в ней размножение бактериофага. При малой множественности инфекции, когда в молодой культуре первоначально поражаются не все бактериальные клетки, литический цикл развития фага с освобождением нового потомства проходит не один раз. В этом случае титр фага в лизате может вырасти в сотни тысяч раз. Опытным путем мы проверяли, при каком варианте множественности инфекции происходит максимальное увеличение титра бактериофага в лизате (табл.1).

Таблица 1 – Зависимость активности фагов от множественности инфекции

Фаги	Вариант	Количество мл		Активность фагов, количество активных корпускул в 1 мл
		Фага	Культуры
L2A	1	0,2	0,2	2 х 109
	2	0,2	0,4	3 х 109
	3	0,2	0,6	4 х 109
	4	0,2	0,8	3 х 109
	5	0,2	1,0	2 х 109
L4A	1	0,2	0,2	1 х 109
	2	0,2	0,4	2 х 109
	3	0,2	0,6	3 х 109
	4	0,2	0,8	2 х 109
	5	0,2	1,0	2 х 109
P100	1	0,2	0,2	2 х 109
	2	0,2	0,4	1 х 1010
	3	0,2	0,6	2 х 1010
	4	0,2	0,8	1 х 1010
	5	0,2	1,0	3 х 109

Оптимальное соотношение между количеством фага и культуры составляет 1:3, активность при этом от 3 х 10⁹ до 2 х 10¹⁰ по методу Грациа.

Таким образом, оптимальное соотношения фаг/бактерия при приготовлении пассажа для фагов L2A, L4A и P100 составляет 1:3. Этот вариант соотношения фаг/бактерия является удобным для работы и был использован нами в дальнейших исследованиях.

Библиографическийсписок:

1. Васильев, Д.А.Разработка параметров количественного определения бактерий видов Listeria monocytogenes и Listeria ivanovii на основе мультиплексной ПЦР в режиме «реального времени» / Д.А. Васильев, Е.Н. Ковалева, Е.В. Сульдина, А.В. Мастиленко // Материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 55-летию ВНИИВВиМ «Актуальные вопросы контроля инфекционных болезней животных». Покров. - 2014. - С. 91-96.

2. Разработка системы фаготипирования листерий / Е.Н. Ковалева, Д.А. Васильев, Е.В. Сульдина // Инфекция и иммунитет. – 2014. – сентябрь, специальный выпуск – С. 87-88.

3. Выделение бактериофагов бактерий рода Listeria / Д.А. Васильев, Е.Н. Ковалева, Е.В. Сульдина // Инфекция и иммунитет. – 2014. – сентябрь, специальный выпуск – С. 69-70.

4.Сульдина Е.В. Применение метода молекулярно-генетического анализа для видовой идентификации мяса/Е.В. Сульдина, О.Л. Колбасова, С.В. Мерчина//Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Материалы V-й Всероссийской (с международным участием) студенческой научной конференции. Ульяновск. -2012. -С. 227-231.

5.Сульдина Е.В. Применение метода Real-time PCR для видовой идентификации мясного сырья в мелкоизмельченных полуфабрикатах и готовых мясных продуктах/Е.В. Сульдина, О.Л. Колбасова,С.В. Мерчина//Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Материалы V-й Всероссийской (с международным участием) студенческой научной конференции. Ульяновск. -2012. -С. 236-240.

6.Сульдина Е.В. Определение видовой принадлежности мясного сырья в мелкоизмельченных полуфабрикатах и готовых мясных продуктах методом ДНК-диагностики/Е.В. Сульдина, О.Л. Колбасова, С.В. Мерчина//Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Материалы V-й Всероссийской (с международным участием) студенческой научной конференции. Ульяновск. -2012. -С. 231-235.

7. Сульдина Е.В. Определение видовой принадлежности мяса методом полимеразной цепной реакции в режиме «Реального» времени/Е.В. Сульдина, О.Л. Колбасова, С.В. Мерчина//Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Материалы V-й Всероссийской (с международным участием) студенческой научной конференции. Ульяновск. -2012. -С. 241-244.

8. Гранкина А.С. Идентификация листерий методом ПЦР в режиме реального времени / А.С. Гранкина, Е.В. Сульдина // Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Материалы IX-й Международной студенческой научной конференции. Ульяновск. - 2016. - С. 84-88.

9. Гранкина А.С. Идентификация листерий методом классической ПЦР / А.С. Гранкина, Е.В.Сульдина // Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Материалы IX-й Международной студенческой научной конференции. Ульяновск. - 2016. - С. 89-93.

10. Сульдина Е.В. Выделение листериозных бактериофагов и изучение их основных биологических свойств / Е.В. Сульдина, Е.Н. Ковалева, Б.И. Шморгун, Д.А. Васильев // Аграрный научный журнал. Саратов. - 2015. № 3. С. 37-41.

11. Сульдина Е.В. Фаготипирование листерий / Е.В.Сульдина, Е.Н. Ковалева, Д.А. Васильев // Современные проблемы физиологии, экологии и биотехнологии микроорганизмов Всероссийский симпозиум с международным участием. Москва - 2014. с. 223.

12. Ковалева Е.Н. Вопросы биоконтроля пищевого листериоза / Е.Н. Ковалева, Д.А. Васильев, Е.В. Сульдина, И.Г. Швиденко, Б.И. Шморгун // Материалы VII Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням с международным участием. Москва. - 2015. с. 157.

13. Сульдина Е.В. Количественное определение патогенных листерий в пищевом сырье и продуктах питания / Е.В. Сульдина, Д.А.Васильев // Материалы Международной научно-практической конференции "Инновации в пищевой технологии, биотехнологии и химии". Саратов. – 2017. - С. 202-204.

14. Сульдина Е.В. Разработка параметров количественного определения патогенных листерий в пищевом сырье и продуктах питания методом Real-Time PCR / Е.В. Сульдина, Д.А.Васильев // Материалы IХ Всероссийской научно-практической конференции с международным участием МОЛЕКУЛЯРНАЯ ДИАГНОСТИКА 2017. Москва. - 2017. - С. 412-413.

15. Сульдина Е.В. Оптимизация эффективности мультиплексной ПЦР-тест-системы для детекции L. monocytogenes и L.ivanovii / Е.В. Сульдина, Д.А.Васильев // Материалы IХ Всероссийской научно-практической конференции с международным участием МОЛЕКУЛЯРНАЯ ДИАГНОСТИКА 2017. Москва. - 2017. - С. 425-426.

16. Гранкина А.C. Идентификация штаммов листерий коллекции 1960-1970 гг. методом ПЦР/ А.C. Гранкина, Е.В. Сульдина // Материалы Международной научной конференции Молодежь и наука XXI века. – Ульяновск. - 2017. - С. 66-71.

17. Ломакин А.А. Дифференциация бактерий видов Bordetella trematum и Bordetella petrii / Ломакин А.А., Мастиленко А.В., Васильева Ю.Б. и др.// Материалы Международной научной конференции Молодежь и наука XXI века. – Ульяновск. - 2017. - С. 83-86.

18. Сульдина Е.В. Выделение бактерий и бактериофагов Yersinia enterocolitica / Е.В. Сульдина, Д.А.Васильев, С.Н. Золотухин // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2017. - № 3 (39). - С. 50-55.

19. Сульдина Е.В. Создание тест-системы на основе бактериофагов для детекции возбудителя пищевого листериоза и мониторинга листериозной инфекции // Молодежный инновационный форум Сборник аннотаций проектов. Ульяновск. - 2016. - С. 353-355.

20. Сульдина Е.В. Листериозные бактериофаги – как средство индикации и идентификации L. monocytogenes. /Сульдина Е.В., Васильев Д.А., Золотухин С.Н. и др. // Материалы Третьей научно-практической конференции с международным участием Бактериофаги: теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности. - 2016. с. 85.

21. Сульдина Е.В. Основные биологические свойства листериозных бактериофагов / Е.В. Сульдина, Е.Н. Ковалева, Д.А. Васильев // Материалы VI Международной научно-практической конференции Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения. Ульяновск. - 2015. - С. 125-127.

Код для цитирования: Скопировать