X Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2018

Цель работы – приготовить индикаторные фаги из коммерческих бактериофагов бактерий рода Listeria и провести контроль полученных препаратов.

Для приготовления индикаторных фагов использовали фаголизаты L2A, L4A и P100 после 5 пассажей. В качестве индикаторных культур для бактериофагов использовали штаммы L.monocytogenes - 9-127, L.monocytogenes - 9-72 и L.monocytogenes - 10522 соответственно.

В колбу № 1 с 45 мл мясопептонного бульона вносили 2 мл бактериофага L2A и 6 мл 24-х часовой культуры L.monocytogenes - 9-127. Бактериофаг L4A в количестве 2 мл вносили в колбу № 2 с 45 мл мясопептонного бульона. В колбу добавляли 6 мл 24-х часовой культуры L.monocytogenes - 9-72. Бактериофаг P100 в количестве 2 мл вносили в колбу № 3 с 45 мл мясопептонного бульона. В колбу добавляли 6 мл 24-х часовой культуры L.monocytogenes - 10522. Контроль: в колбы № 4, №5 и №6 с 45 мл мясопептонного бульона вносили 24-х часовые культуры L.monocytogenes - 9-127, L.monocytogenes - 9-72 и L.monocytogenes - 10522 в количестве 6 мл.

Смеси инкубировали в течение 6 часов при температуре 37°С. Через 6 часов содержимое колб № 1, №2 и №3 осталось прозрачным. Полученные фаголизаты пропускали через бактериальные фильтры. Бульон в колбах № 4, №5 и №6 помутнел вследствие роста культур бактерий.

Отфильтрованные бактериофаги L2A, L4A и P100 разлили по 10 мл в стерильные пробирки и герметично закрыли. На пробирки наклеили этикетки с указанием наименования фага и даты упаковки.

Из полученного объема отбирали пробу каждого фага по 5 мл для определения чистоты физических свойств и титра фага по отношению к эталонной культуре.

Для определения внешнего вида, цвета, наличия хлопьев, пленок, механических примесей каждую пробирку с фагом просматривали визуально в проходящем свете. Индикаторные фаги L2A, L4A и P100 не содержали посторонних примесей, были прозрачными светло-желтого цвета.

Для проверки на контаминацию каждый фаг в количестве 0,2 мл высевали в пробирки с 5 мл мясопептонного бульона, со средой Китта-Тароцци, со средой Сабуро и во флаконы с 50 мл мясопептонного бульона, со средой Китта-Тароцци. Посевы проводили в 2 пробирки и 2 флакона с каждой средой из каждого образца. Пробирки с засеянной средой Сабуро культивировались при 20 – 24°С. Посевы на других средах культивировали при температуре 37°С. Через двое суток из жидких сред материал пересевали на мясопептонный агар, в мясопептонный бульон, среду Китта-Тароцци, по две пробирки и во флаконы с мясопептонным бульоном, со средой Китта-Тароцци. Первичные посевы выдерживали в термостате 10 суток, а вторичные – 8 суток. На питательных средах с посевами рост бактериальной и грибковой микрофлоры отсутствовал.

Литическую активность бактериофагов L2A, L4A и P100 определяли методами Аппельмана (метод серийных разведений в жидких питательных средах) и Грациа (метод агаровых слоев на плотных питательных средах) [1-21].

Литическая активность фагов составляла от 10^-9 до 10^-10 по методу Аппельмана и от 3 х 10⁹ до 2 х 10¹⁰ по методу Грациа (табл. 1).

Таблица 1 – Литическая активность листериозных бактериофагов

Бактериофаги	Литическая активность
	по методу Аппельмана	по методу Грациа
L2A	10-9	5 х 109
L4A	10-9	3 х 109
P100	10-10	2 х 1010

Таким образом, мы приготовили индикаторные фаги из коммерческих бактериофагов бактерий рода Listeria и провели их бактериологический контроль, в котором установили чистоту препарата.

Библиографическийсписок:

1. Васильев, Д.А.Разработка параметров количественного определения бактерий видов Listeria monocytogenes и Listeria ivanovii на основе мультиплексной ПЦР в режиме «реального времени» / Д.А. Васильев, Е.Н. Ковалева, Е.В. Сульдина, А.В. Мастиленко // Материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 55-летию ВНИИВВиМ «Актуальные вопросы контроля инфекционных болезней животных». Покров. - 2014. - С. 91-96.

2. Разработка системы фаготипирования листерий / Е.Н. Ковалева, Д.А. Васильев, Е.В. Сульдина // Инфекция и иммунитет. – 2014. – сентябрь, специальный выпуск – С. 87-88.

3. Выделение бактериофагов бактерий рода Listeria / Д.А. Васильев, Е.Н. Ковалева, Е.В. Сульдина // Инфекция и иммунитет. – 2014. – сентябрь, специальный выпуск – С. 69-70.

4.Сульдина Е.В. Применение метода молекулярно-генетического анализа для видовой идентификации мяса/Е.В. Сульдина, О.Л. Колбасова, С.В. Мерчина//Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Материалы V-й Всероссийской (с международным участием) студенческой научной конференции. Ульяновск. -2012. -С. 227-231.

5.Сульдина Е.В. Применение метода Real-time PCR для видовой идентификации мясного сырья в мелкоизмельченных полуфабрикатах и готовых мясных продуктах/Е.В. Сульдина, О.Л. Колбасова,С.В. Мерчина//Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Материалы V-й Всероссийской (с международным участием) студенческой научной конференции. Ульяновск. -2012. -С. 236-240.

6.Сульдина Е.В. Определение видовой принадлежности мясного сырья в мелкоизмельченных полуфабрикатах и готовых мясных продуктах методом ДНК-диагностики/Е.В. Сульдина, О.Л. Колбасова, С.В. Мерчина//Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Материалы V-й Всероссийской (с международным участием) студенческой научной конференции. Ульяновск. -2012. -С. 231-235.

7. Сульдина Е.В. Определение видовой принадлежности мяса методом полимеразной цепной реакции в режиме «Реального» времени/Е.В. Сульдина, О.Л. Колбасова, С.В. Мерчина//Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Материалы V-й Всероссийской (с международным участием) студенческой научной конференции. Ульяновск. -2012. -С. 241-244.

8. Гранкина А.С. Идентификация листерий методом ПЦР в режиме реального времени / А.С. Гранкина, Е.В. Сульдина // Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Материалы IX-й Международной студенческой научной конференции. Ульяновск. - 2016. - С. 84-88.

9. Гранкина А.С. Идентификация листерий методом классической ПЦР / А.С. Гранкина, Е.В.Сульдина // Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Материалы IX-й Международной студенческой научной конференции. Ульяновск. - 2016. - С. 89-93.

10. Сульдина Е.В. Выделение листериозных бактериофагов и изучение их основных биологических свойств / Е.В. Сульдина, Е.Н. Ковалева, Б.И. Шморгун, Д.А. Васильев // Аграрный научный журнал. Саратов. - 2015. № 3. С. 37-41.

11. Сульдина Е.В. Фаготипирование листерий / Е.В.Сульдина, Е.Н. Ковалева, Д.А. Васильев // Современные проблемы физиологии, экологии и биотехнологии микроорганизмов Всероссийский симпозиум с международным участием. Москва - 2014. с. 223.

12. Ковалева Е.Н. Вопросы биоконтроля пищевого листериоза / Е.Н. Ковалева, Д.А. Васильев, Е.В. Сульдина, И.Г. Швиденко, Б.И. Шморгун // Материалы VII Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням с международным участием. Москва. - 2015. с. 157.

13. Сульдина Е.В. Количественное определение патогенных листерий в пищевом сырье и продуктах питания / Е.В. Сульдина, Д.А.Васильев // Материалы Международной научно-практической конференции "Инновации в пищевой технологии, биотехнологии и химии". Саратов. – 2017. - С. 202-204.

14. Сульдина Е.В. Разработка параметров количественного определения патогенных листерий в пищевом сырье и продуктах питания методом Real-Time PCR / Е.В. Сульдина, Д.А.Васильев // Материалы IХ Всероссийской научно-практической конференции с международным участием МОЛЕКУЛЯРНАЯ ДИАГНОСТИКА 2017. Москва. - 2017. - С. 412-413.

15. Сульдина Е.В. Оптимизация эффективности мультиплексной ПЦР-тест-системы для детекции L. monocytogenes и L.ivanovii / Е.В. Сульдина, Д.А.Васильев // Материалы IХ Всероссийской научно-практической конференции с международным участием МОЛЕКУЛЯРНАЯ ДИАГНОСТИКА 2017. Москва. - 2017. - С. 425-426.

16. Гранкина А.C. Идентификация штаммов листерий коллекции 1960-1970 гг. методом ПЦР/ А.C. Гранкина, Е.В. Сульдина // Материалы Международной научной конференции Молодежь и наука XXI века. – Ульяновск. - 2017. - С. 66-71.

17. Ломакин А.А. Дифференциация бактерий видов Bordetella trematum и Bordetella petrii / Ломакин А.А., Мастиленко А.В., Васильева Ю.Б. и др.// Материалы Международной научной конференции Молодежь и наука XXI века. – Ульяновск. - 2017. - С. 83-86.

18. Сульдина Е.В. Выделение бактерий и бактериофагов Yersinia enterocolitica / Е.В. Сульдина, Д.А.Васильев, С.Н. Золотухин // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2017. - № 3 (39). - С. 50-55.

19. Сульдина Е.В. Создание тест-системы на основе бактериофагов для детекции возбудителя пищевого листериоза и мониторинга листериозной инфекции // Молодежный инновационный форум Сборник аннотаций проектов. Ульяновск. - 2016. - С. 353-355.

20. Сульдина Е.В. Листериозные бактериофаги – как средство индикации и идентификации L. monocytogenes. /Сульдина Е.В., Васильев Д.А., Золотухин С.Н. и др. // Материалы Третьей научно-практической конференции с международным участием Бактериофаги: теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности. - 2016. с. 85.

21. Сульдина Е.В. Основные биологические свойства листериозных бактериофагов / Е.В. Сульдина, Е.Н. Ковалева, Д.А. Васильев // Материалы VI Международной научно-практической конференции Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения. Ульяновск. - 2015. - С. 125-127.

Код для цитирования: Скопировать