X Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2018

Бактерии рода Providencia широко распространены в природе, их выделяют из воды, почвы, фекалий и мочи животных и человека.

Некоторые штаммы, вероятно, входят в состав нормальной микрофлоры кишечника, однако среди них встречаются и патогенные варианты, способные вызывать вспышки гастроэнтеритов, токсикоинфекций мочевых инфекций у детей и взрослых людей, раневые послеоперационных инфекций, желудочно-кишечных заболеваний у молодняка животных.

Эффективность лечебных мероприятий во многом зависит от своевременности диагностики болезни, поэтому совершенствованию методов лабораторной диагностики заболеваний, вызываемых указанными микроорганизмами, является актуальной проблемой.

При постановке диагноза бактериологическим методом на заболевания, причиной которых являются представители рода Providencia , существует ряд трудностей. Одна из них состоит в том, что основой идентификации этих бактерий являются их биохимические свойства. Трудоемкость и длительность изучения ферментативных свойств не позволяют быстро и точно идентифицировать названные микроорганизмы.

В связи с этим возникла необходимость в поиске альтернативных методов лабораторной диагностики, которые были бы менее трудоемкими, более быстрыми и доступными для лабораторий любого уровня. Одним из таких методов является фагодиагностика.

Поэтому целью наших исследований явилось изыскание активных бактериофагов, лизирующих патогенные штаммы бактерий рода Providencia.

Методика исследований

Источником для выделения бактериофагов служили сточные воды взятые из животноводческих помещений разных хозяйств Ульяновской и Самарской областей и больниц города Ульяновска.

В качестве индикаторных культур были использованы 26 патогенных штаммов рода Providencia, полученные из музея кафедры и выделенные нами из патологического материала и объектов внешней среды.

В основу метода для поиска фагов положена схема, предложенная Грациа. Исследуемый материал (сточные воды) засевали с бактериями Providencia на МПБ. Бульон инкубировали при 37°С в течение 14-18 часов, затем фильтровали через бумажные фильтры. Полученный фильтрат подогревали при 60°С в течение 30 минут для инактивации сопутствующей микрофлоры. Наличие фага в фильтрате выявляли при его посеве на плотные питательные среды (1,5% мясопептонный агар) методом агаровых слоев.

Селекцию штаммов фагов производили методом пассирования штаммов на индикаторных культурах с последующим клонированием однородных негативных колоний, типичной для каждого изолята.

Активность выделенных фагов определяли по методам Грациа и Аппельмана.

Результаты исследований

В результате проведенных исследований нами было выделено 16 термостабильных изолята бактериофагов, образующих прозрачные колонии различного диаметра от 1,0 до 5,0 мм или стерильные пятна в виде зон лизиса, диаметром от 5,0 до 9,0 мм. Литическая активность выделенных фагов по методу Аппельмана составляет от 10^-6 до 10^-9, по методу Грациа – от 2,1х10⁸ до 1,2х10¹¹ фаговых корпускул в 1 мл среды.

Изучение специфичности двух бактериофагов (F-67 УГСХА, F-87 УГСХА), имеющих высокую активность и широкий диапазон литического действия проводили по отношению к представителям других родов семейства Enterobacteriaceae: Escherichiaspp., Proteusspp., Morganellaspp., Citrobacterspp., Salmonellaspp., Enterobacterspp., Yersiniaenterocolitica, а также родов других семейств: Staphylococcusspp., Streptococcusspp., Pseudomonasspp. на плотном питательном агаре методом нанесения капель фагов на газон исследуемой культуры.

Для этого на поверхность МПА в чашках Петри пипеткой наносили 3 – 4 капли 18 часовой бульонной культуры исследуемых микроорганизмов. Затем равномерно распределяли по поверхности среды стерильным шпателем. Чашки ставили в термостат для подсушивания на 15 – 20 минут. После чего, дно чашки маркером разделили на два сектора: на первый сектор засеянного агара, пипеткой легким прикосновением капли, наносили исследуемый фаг; на второй - по центру в качестве контроля наносили стерильный МПБ. Чашку наклоняли, чтобы капли стекли, а затем инкубировали при температуре 37°С, оценку результатов проводили через 24 часа.

В результате проведенных исследований было установлено, что селекционированные фаги неактивны по отношению к представителям бактерий других родов и семейств, то есть явились специфичными для бактерий гомологичного рода.

Таким образом, нами было выделено и селекционировано 16 термостабильных изолятов фагов, активных в отношении бактерий вида Providenciarettgeri.

Выводы

Были отобраны два специфичных штамма фагов F-67 УГСХА и F-87 УГСХА с наиболее выраженными биологическими свойствами (литическая активность, спектр литической активности, специфичность, устойчивость), которые позволяют использовать их для изготовления диагностических и лечебных биопрепаратов.

Список литературы

Адамс М. Бактериофаги (перевод с английского) // - М., - 1961. -521С.

Барт Н.Г. Биологические свойства бактериофагов Providencia / Н.Г. Барт, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев // Актуальные вопросы аграрной науки и образования: Материалы Международной научно-практической конференции. – Ульяновск, 2009. – С. 6-8.

Барт Н.Г. Спектр литической активности бактериофагов Providencia / Н.Г. Барт, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев // Актуальные вопросы аграрной науки и образования: Материалы Международной научно-практической конференции. – Ульяновск, 2013. – С. 12-15.

Васильев, Д.А. Характеристика биологических свойств бактериофагов вида Bacillussubtilis / Д.А. Васильев Д.А., Н.А. Феоктистова М.А. Юдина [и др.] //Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2011. - № 1. - С. 79-83.

Ганюшкин В.Я. Бактериофаги сальмонелл и их применение в ветеринарии // Учебное пособие – Ульяновск. – 1988. – С.45.

Гольдфарб Д.М. Бактериофагия.// -М.: Медгиз. -1961. – С.297.

Барт Н.Г. Исследование бактериофагов рода Providenciaна наличие в составе их генетического аппарата профага / Н.Г. Барт, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев // Аграрная наука и образование нразвития: опыт, проблемы и пути их решенияа современном этапе : Материалы VII Международной научно-практической конференции. – Ульяновск, 2016. – С. 196-203.

Код для цитирования: Скопировать