ИССЛЕДОВАНИЕ ПОЛИФЕНОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ И ПОЛИСАХАРИДОВ ВЕРБЕЙНИКА ТОЧЕЧНОГО (LYSIMACHIA PUNCTATA L. )
Вербейник точечный (
LysimachiapunctataL.) – многолетнее травянистое растение, относящееся к семейству первоцветных (
Primulaceae).
Он содержит такие биологически активные вещества, как флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты, дубильные вещества и углеводы. Настои и отвары из вербейника точечного применяют при желудочно-кишечных нарушениях, воспалениях кожи, молочнице, заболеваниях легких и мигрени [6].
Обзор литературы показал, что сведений о химическом составе вербейника точечного недостаточно, и не применяется в практических целях. За счет привлекательного внешнего вида и неприхотливости это растение часто используется в ландшафтном дизайне для оформления клумб, альпийских горок.
Исходя из вышеизложенного, целью работы явился предварительный хроматографический анализ отдельных фракций, полученных из травы вербейника точечного и исследование полисахаридов в оставшемся шроте.
Исходное сырье экстрагировали 95%, 70%, 40% спиртом этиловым. Предварительную оценку полифенольных соединений осуществляли хроматографически с применением качественных реакций с ионизирующими и комплексообразующими добавками.
. Была проведена характерная качественная реакция на флавоноиды –цианидиновая проба или проба Синода. В результате проведенной реакции обнаружено красное окрашивание [5].
Полученные из сырья спиртовые, спиртоводные извлечения использовали для бумажной хроматографии в системе растворителей н-бутанол – уксусная кислота – вода (4:1:5) и 15% уксусная кислота. Обнаружение компонентов на хроматограмме осуществляли просматриванием их в УФ свете. Следует отметить, что наибольшее разделение компонентов данного извлечения наблюдается в системе БУВ (4:1:5), по сравнению с 15% уксусной кислотой, где зоны адсорбции размыты [1, 3].
После просматривания в УФ свете хроматограммы обрабатывали 5 % спиртовым раствором AlCl3. При этом наблюдали изменение пятен в видимом свете и в УФ-свете.
Предварительный хроматографический анализ свидетельствует о том, что наибольшее количество полифенольных соединений наблюдается в извлечении, полученном спиртом этиловым 40%. Поэтому в последующих наших исследованиях использовали в качестве экстрагента спирт этиловый 40%.
Полученное извлечение последовательно обрабатывали хлороформом, диэтиловым эфиром, этилацетатом, н-бутанолом. Провели хроматографирование четырех фракций, в качестве подвижной фазы использовали БУВ (4:1:5) [5]. Сравнительный анализ четырех фракций представлен в таблице 1.
Таблица 1 – Предварительный хроматографический анализ полученных фракций
Исследуемые фракции
|
Значение коэффи-
циентов подвижности
|
До обработки
(видимый свет)
|
До обработки
(УФ свет)
|
После обработки AlCl3
(видимый свет)
|
После обработки AlCl3
(УФ свет)
|
Окраска зон адсорбции
|
Хлороформное
извлечение
|
0,46;
0,15.
|
1)бесцветная;
2)светло-желтая.
|
1) синяя;
2)темно-бурая.
|
1)светло-зеленая;
2)светло-желтая.
|
1)ярко синяя;
2)светло-желтая.
|
Эфирное извлечение
|
1) 0,65;
2) 0,50;
3) 0,22;
4) 0,08.
|
1)бесцветная:
2,3) светло-оранжевая;
4)желтая.
|
1)фиолетовая;
2,3) темно-бурая;
4)желтая.
|
1)светло-желтая;
2-4)желтая.
|
1)ярко голубая;
2-4)ярко желтая.
|
Этилацетатное извлечение
|
1) 0,64;
2) 0,51;
3) 0,24.
|
1)желтая;
2,3) оранжевая.
|
1)желтая;
2,3)темно-бурая.
|
1)светло-желтая;
2,3)желтая.
|
1) ярко желтая;
2,3)желтая.
|
Бутанольное извлечение
|
0,63;
0,42;
0,32;
0,26;
0,21.
|
1-4)светло-желтая;
5)светло-оранжевая.
|
1-4)темно-бурая;
5)желтая.
|
1-4)ярко желтая;
4)желтая.
|
1-3)желто-коричневая;
4,5)ярко-желтая.
|
40% спиртовое извлечение из вербейника
|
0,352;
0,475;
0,565;
0,654;
0,775.
|
1-2)
оранжевая;
3-5)
бесцветная.
|
1)темно-бурая;
2,4)бурая;
3,5)синяя.
|
1)светло-коричневая;
2,4)желтая;
3,5)светло-желтая.
|
1,2,4)ярко желтая;
3,5)голубая.
|
Результатом фракционирования явилось разделение извлечения, полученного из травы вербейника точечного 40% спиртом этиловым. Полученные фракции характеризуются минимальным содержанием соединений полифенольной природы. В дальнейших наших работах мы проведем идентификацию каждой зоны адсорбции.
При использовании 40% спирта этилового в качестве экстрагента в шроте остаются полисахариды, которые обладают способностью связывать и выводить из организма радионуклиды и тяжелые металлы [2].
Оставшийся шрот исследовали на содержание полисахаридов. При выделении полисахаридов использовали метод Н.К. Кочеткова и M. Sinner [2]. Были выделены четыре фракции: водорастворимые полисахариды (ВРПС), пектиновые вещества (ПВ), гемицеллюлоза А (Гц А) и гемицеллюлоза Б (Гц Б). Количественное содержание данных фракций определяли гравиметрическим методом [2, 4].
Полученные фракции подвергали кислотному гидролизу. Хроматографически с использованием стандартных образцов определяли моносахаридный состав [2]. Результаты по изучению полисахаридного комплекса, представлены в таблице 2.
Таблица 2 – Сведения о полученных полисахаридных фракциях из шрота травы вербейника точечного (Lysimachia punctata L.)
Фракции
|
Выход
фракций, %
|
Моносахариды после гидролиза
|
Внешний вид фракций
|
ВРПС
|
1,56
|
галактоза,
арабиноза
|
Кристаллический порошок коричневого цвета, с характерным запахом, кисловатого вкуса, растворим в воде
|
ПВ
|
10,67
|
галактоза,
галактуроновая кислота,
арабиноза,
рамноза
|
Кристаллический порошок бледно-коричневого цвета, сладковатого вкуса, без запаха, растворим в воде
|
Гц А
|
2,73
|
галактоза,
арабиноза
|
Темно-коричневатый порошок, без запаха, кисловатого вкуса, не растворим в воде
|
Гц Б
|
3,89
|
Гравиметрический анализ указывает на преобладание пектиновых веществ в траве вербейника точечного. Фракция ПВ представлена галактозой, галактуроновой кислотой, арабинозой и рамнозой
Выводы
В результате работы был проведен предварительный хроматографический анализ полифенольных соединений, выделены четыре фракции полисахаридного комплекса. Гравиметрически определили преобладание пектиновых веществ.
Литература
Бандюкова, В.А. Методы исследования природных флавоноидов / В.А. Бандюкова, А.Л. Шинкаренко, А.Л. Казаков. – Пятигорск: Изд-во Бальнеол. ин-т, 1977. – 72 с.
Кочетков, Н.К. Химия биологически активных соединений / Н.К. Кочетков.– М., 1970.– 486 с.
Определение биологически активных соединений фенольной и полифенольной природы в различных объектах методами хроматографии / М.В. Кочетова [и др.] // Успехи химии.- 2007.– Т.76, №1.– С.88-100.
Пеливанова, С.Л. Полисахариды крыжовника отклоненного (Grossularia reclinata (L.) Mill.) / С.Л. Пеливанова [и др.] // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. – Пятигорск, 2013. – Вып. 68. - С. 76-77.
Природные флавоноиды / Д.Ю. Корулькин [и др.]. – Новосибирск: Гео, 2007. – 232 с.
http://cveti-rasteniya.ru/verbejnik-tochechnyj.html