IX Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2017

Микроорганизмы, особенно относящиеся к неустой­чивым видам, при высушивании в суспензиях, не содер­жащих защитных веществ, подвержены значительным изменениям, которые сопровождаются не только утра­той жизнеспособности, но и разрушением их клеточной структуры.

Цель: подобрать оптимальный состав среды (стабилизатора) для лиофилизации бактерий.

Материалы и методы. Штаммы бактерий:Alcaligenessp. B-5269; Acinetobacterbaumannii B-10246, Pseudomonas putida 18 (B-1827), Escherichia coli B-25422, Bacillus mycoides 537, Bacillus сereus 96.

Питательные среды: мясопептонный бульон, мясопептонный агар, cухое обезжиренное молоко ГОСТ Р 52791-2007, сахароза, дрожжевой экстракт, лактоза, сорбит, желатин пищевой ГОСТ 11293-89.

Главным критерием для подбора сред являлось: доступность компонентов; хорошая выживаемость бактерий при высушивании; стабильность при заморозке и высушивании; внешний вид высушенного препарата (образование плотной «таблетки»); хорошая растворимость (регидратация) лиофилизата.

Нами был проведен литературный анализ защитных сред для лиофилизации, на основании собранных данным были отобраны наиболее часто используемые среды:

1пропись – лактоза (4,0%), пептон (20,0%), на 100 мл Н₂О;

2пропись – ГЛА (гидролизата лактольбумина) (2,5%), сахароза (5,0%), глутамат Na (1,0%), на 100 мл Н₂О;

3пропись – сахароза (50,0%), пептон (10,0%), на 100 мл Н₂О ;

4пропись – пептон (20,0%), лактоза (4,0%), на 100 мл Н₂О;

5пропись – ГЛА (5,0%), сахароза (10,0%), желатин (1,0%), на 100 мл Н₂О;

6пропись – ГЛА (20%), обезжиренное молоко в соотношении 1:5 (без воды).

7 пропись – сахароза (10,0%), желатин (1,0%),агар (0,1%), на 100 мл Н₂О;

8 - среда Файбича приемлема как для вирусов так и для бактерий.

Хорошими защитными свойствами обладает обезжирен­ное молока Микроорганизмы при высушивании в моло­ке сохраняют высокую выживаемость: Staphylococcus и Е. coli - до 70% (Lambin и др., 1958), фитопатогенные бактерии -до 60-80% (Е. В. Самосудова, 1965), Past, pestis -до 60% (Heckly и др., 1958). Культура Hemoph. pertussis, по сообщению Flosdorf и Kimball (1940), при высушивании в молоке сохраняла жизнеспособность и все свои первоначальные свойства при хранении в тече­ние более 2 лет.

Сахарозо-желатиновая среда считается одним из луч­ших стабилизаторов при высушивании вирусов. По данным А.А. Смородинцева и др. (1958), активность противопаротитной живой вакцины при высушивании в этой среде снижа­лась незначительно и была практически стабильной при хранении сухих препаратов в условиях температуры + 2-4°С.

На основании этого нами было сконструировано и приготовлено четыре среды (табл.1).

Таблица 1 - Состав сконструированных защитных сред (стабилизаторы)

№ защитной среды	Состав защитной среды
Среда №1	0,1 гр - агара, 5 гр - желатина, 10 гр – сахарозы, 85 мл - дист. воды
Среда №2	0,1 гр - агара, 1,5 гр - желатина, 10 гр – сахарозы, 85мл - дист. воды
Среда №3	5 гр – лактозы, 5 гр – сахарозы, 8 гр – сухого обезжиренного молока, 82 мл - дист. воды
Среда №4	1 гр. – лактозы, 20 гр - сухого обезжиренного молока, 80 мл - дист. воды

Приготовленные среды по 100 мл разливали в стеклянные пузырьки объемом 250 мл (рис.5). Среды №1 и №2 стерилизовали при 0,5 атм в течении 30-35 минут. Среды №3 и №4 стерилизовали текучим паром 3 раза, стерильность проверяли путем инкубации в течении 3 суток при 37˚С с последующим посевом на МПА. Защитные среды хранили при 5 - 8˚С не более 1 месяца.

Вывод

По результатам проведенных исследований включавших проведение эксперимента, а также работу с литературой, нами были подобраны четыре защитные среды (стабилизатора) отвечающие требования необходимые для лиофильного высушивания культур микроорганизмов. Все среды просты в приготовлении, компоненты общедоступны, имеют хорошие отзывы в литературных источниках.

Библиографическийсписок.

1. Долинов К. Е. Основы технологии сухих биопрепаратов / К. Е. Долинов // Изд. «Медицина», М.-1969. - с. 220.

2. Карпов, А. М. Сушка продуктов микробиологического синтеза / А. М. Карпов, А. А. Улумиев. - М., 1982-216 с.

3. American type culture collection methods: 1. Laboratory manual on preservation. Freezing and freeze-drying as applied to algae, bacteria, fungi and protozoa. - Rockville (Maryland): ATCC. - 2000. - 51 p.

4. Ефременко А.А. Разработка биотехнологии вакцины чумной живой сухой со сниженным количеством человеко-доз в производственной упаковке (ампуле): Дис. … канд. мед. наук. / А.А. Ефременко. - Ставрополь, 2005. - 117 с.

5. Hubalek, Z. Liquid nitrogen storage of yeast cultures: 1. Survival and literature review of the preservation of fungi at ultralow temperatures / Z. Hubalek, A. Kockova- Krotochvilova // Antonie van Leeuwenhoeck. - 2010. - V. 44. - № 2. - P. 229-234.

6. Феоктистова Н.А. Действие экспериментального биопрепарата на энтеробактерии родов Proteus, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella / Н.А. Феоктистова с соавт. // Студенческий научный форум - 2015: VII Международная студенческая электронная научная конференция, электронное издание. – Саратов, – 2015

7. Васильев Д.А. Изучение биохимических свойств B.cereus / Д.А. Васильев, А.И. Калдыркаев, Н.А. Феоктистова // Проблемы профилактики и борьбы с особо опасными, экзотическими и малоизученными инфекционными болезнями животных: международная научно-практическая конференция, посвященная 50-летию ВНИИВВиМ.- Покров, 2008 – С. 222-224

8. Похиленко, В. Д. Методы длительного хранения коллекционных культур микроорганизмов и тенденции развития / В. Д. Похиленко, А. М. Баранов, К. В. Детушев // Известия высших учебных заведений. Поволжский регион. Медицинские науки. - 2009. - Т. 12, № 4. - с. 99-121.

9. Калдыркаев А.И. Изучение некоторых биологических свойств бактериофагов вида Bacillus cereus / А.И. Калдыркаев, Н.А. Феоктистова, Г.Ф. Архипова // Актуальные проблемы инфекционной патологии ветеринарной медецины: материалы конференции молодых ученых. – Покров – 2009 – с. 157-159

10. Макеев В.А. Изучение чувствительности бактерий рода Bacillus к различным концентрациям хлорида натрия / В.А. Макеев, М.А. Юдина, А.Х. Мустафин, А.И. Калдыркаев, Н.А. Феоктистова, С.В. Мерчина // Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения: Международная научно-практическая конференция, посвященная Всемирному году ветеринарии в ознаменование 250-летия профессии ветеринарного врача. - Ульяновск, 2011. – с.185-188.

11. Калдыркаев А.И. Характеристика биологических свойств бактериофагов вида Bacillus subtilis / Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин, И.Н. Хайруллин, Н.А. Феоктистова, А.И. Калдыркаев, и др.// Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. – Ульяновск: УГСХА, 2011. - № 1 (13). – с.79-84.

12. Калдыркаев А.И. Методика выделения фагов бактерий видов Bacillus cereus и Bacillus subtilis, перспективы их применения / А.И. Калдыркаев, Д.А. Васильев, Н.А. Феоктистова, А.Х Мустафин, М.А. Юдина // Естественные и технические науки: - М.: изд-во «Спутник+», 2011. - №2 (52). - с. 83-86.

13. Феоктистова Н.А. Разработка схемы исследования материала с целью выделения и ускоренной идентификации бактерий видов Bacillus cereus и Bacillus subtilis / Н.А. Феоктистова, А.И. Калдыркаев, А.Х. Мустафин, // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. - Оренбург: ОГАУ, 2011. - № 4(32). - С. 288-291.

14. Калдыркаев А.И. Биохимические свойства бактерий Bacillus cereus / А.И. Калдыркаев, Н.А. Феоктистова, А.В. Алешкин, Д.А. Васильев // Биотехнология: реальность и перспективы в сельском хозяйстве: материалы Международной научно-практической конференции. - Саратов: изд-во «КУБиК», 2013. – с. 186-188.

15. Васильев Д.А. Биоиндикация бактерий Bacillus mycoides в объектах санитарного надзора / Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин, Н.А. Феоктистова, М.А. Лыдина, А.И. Калдыркаев, В.А. Макеев, Д.А. Васильев, И.Г. Швиденко // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. – Ульяновск: УГСХА, 2013. - № 3. – с.52-57.

16. Калдыркаев А.И. Распространение Bacillus cereus и Bacillus mycoides в объектах санитарного надзора / А.И. Калдыркаев, Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин, Н.А. Феоктистова // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - Ульяновск: УГСХА, 2014. - № 1. - с.43-47

Код для цитирования: Скопировать