IX Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2017

Bacillus subtilis — вид грамположительных спорообразующих аэробных почвенных бактерий. Первоначально были описаны в 1835 Эренбергом как Vibrio subtilis, в 1872 были переименованы Коном в Bacillus subtilis. Название «сенная палочка» вид получил из-за того, что накопительные культуры этого микроорганизма получают из сенного экстракта. Является продуцентом некоторых полипептидных антибиотиков, а также ферментов (амилазы, протеазы), получаемых промышленно ^[1].

Палочковидная бактерия, размер 3-5 × 0,6 мкм. Споры овальные, не превышающие размер клетки, расположены центрально. Перитрихиальное расположение жгутиков, подвижная. Колонии сухие, мелкоморщинистые, бархатистые, бесцветные или розовые. Край колонии волнистый. Растёт на МПА, МПБ, а также на средах, содержащих растительные остатки, простых синтетических питательных средах для гетеротрофов. Хемоорганогетеротроф, аммонифицирует белки, расщепляет крахмал, гликоген. Развивается при температуре +5…+45°С.

Согласно Российским СанПиН, условно патогенна для человека. По данным из Большой советской энциклопедии (2012 года), не патогенна^[1], также как и по данным зарубежных источников. Доказано, что штаммы B. subtilis не вредны для человека и животных. Отсутствие патогенности у штаммов Bacillus subtilis дало основание для присвоения им Управлением по контролю качества продовольственных и лекарственных средств США статуса GRAS (generally regarded as safe) — безопасных организмов (К. Харвуд, 1992).

Были изучены морфологические, тинкториальные, культуральные и некоторые биохимические свойства штамма Bacillus subtilisполученногоиз музея кафедры Микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы УГСХА им. П.А. Столыпина.

Материалы и методы. Набор для окраски по Граму, среды Гисса, 0,7% мясопептонный агар, 1,2 % мясопептонный агар (ГРМ), мясопептонный бульон (ГРМ), 3% раствор перекиси водорода, 1 % раствор тетраметилпарафенилендиамина дигидрохлорида. световой микроскоп МБИ-3, бактериологическая петля, цифровая камера-окуляр для микроскопа модель DCM 130, термостат ТС 1/80 СПУ, штативы, пробирки, пробки, предметные стекла, вода дистиллированная, автоклав ВК-75, штамм Bacillus subtilis( музея кафедры «Микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы» УГСХА им. П.А. Столыпина). Исследование проводили стандартными бактериологическими методами, многократно апробированном сотрудниками кафедры МВЭиВСЭ ФГБОУ ВО Ульяновской ГСХА [2-7].

Суточную бульонную культуру Bacillus subtilis высеяли на мясопептонный агар (ГРМ), в пробирки со средами Гисса, полужидкий агар. Посевы культивировали при 30 ºС сутки, затем учитывали некоторые результаты: реакция сред Гисса, подвижность (рост в полужидком агаре), характер роста на мясопептонном агаре. Затем были поставлены по стандартным методикам тесты на определение способности продуцировать ферменты каталазу и оксидазу, приготовлен мазок и окрашен по Граму.

В результате проведенных исследований, установлено, что исследуемая культура Bacillus subtilisкаталазоположительная, оксидазоположительная (рисунок 1,2). Глюкозо-, лактозо-, мальтозо-, сорбит-, инулин-, дульцит-, маннит-отрицателная, сахарозоположительная (рисунок 3). Штамм Bacillus subtilisнеподвижен, рост в полужидком ангаре локализуется строго в верхней части на поверхности среды, что говорит о том, что для данной культуры оптимальными являются аэробные условия (рисунок 4).

В мазке, окрашенном по Граму культура представлена грамотрицательными обнаруживаются прямые палочковидные клетки, расположенные одиночно, попарно или цепочкой. Споры овальные, расположены в клетке центрально.

Рисунок 1 – Положительный тест на наличие фермента каталазы у культуры Bacillus subtilis	Рисунок 2 - Положительный тест на наличие фермента оксидазы у культуры Bacillus subtilis
Рисунок 3 - Результат определения ферментативных свойств Bacillus subtilis на ряду Гисса	Рисунок 4 - Результат определения подвижности Bacillus subtilis

На мясопептонном агаре через сутки культивирования образует серовато-белые мелкоморщинистые колонии с волнистыми краями, слегка врастающими в агар, вязкой консистенции (рисунок 5). На мясопептонном бульоне рост сопровождается помутнением среды, образованием пленки серовато-белого цвета и осадка (рисунок 6).

Рисунок 5 – Колонии Bacillus subtilis на мясопептонном агаре	Рисунок 6 – Рост Bacillus subtilis в мясопептонном бульоне

Выводы: в результате проведенной работы, установлено, что штамм Bacillus subtilisпо исследуемым культуральным, морфологическим, тинкториальным и биохимическим свойствам в целом, является типичным представителем вида Bacillus subtilis.

Используемые источники:

1. Большая советская энциклопедия [электронный ресурс]: портал. -Slovar.cc —– Режим доступа: https://slovar.cc/enc/bse/2040317.html

2. Садртдинова Г.Р. Сравнительная эффективность методов выделения бактериофагов Klebsiellaoxytoca/ Г.Р. Садртдинова, Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин/ Вестник Ульяновской сельскохозяйственной академии.-№4 (32).- С.68-72.

3. Садртдинова Г.Р. Выделение бактериофага бактерий Klebsiellaoxytoca под действием рентгеновского облучения/ Г.Р.Садртдинова, Д.А.Васильев, С.Н.Золотухин // Вестник Ульяновской сельскохозяйственной академии.-№1 (33).- С.76-81.

4. Ефрейторова Е.О., Пульчеровская Л.П., Васильев Д.А. Изучение биологических свойств бактерий serratia marcescen выделенных из пищевых продуктов и объектов окружающей среды / Научный вестник Выпуск №13.г. Дмитровград. Технологический институт филиал ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А.Столыпина» С. 175-180

5. Пульчеровская Л.П. Индикация бактерий рода Citrobacter с помощью реакции нарастания титра фага (РНФ)/ Л.П.Пульчеровская, С.Н.Золотухин, Д.А.Васильев// Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. – 2013. – № 1(21). – С. 60 – 64.

6. Кузнецова, О.В. Изучение биологических свойств бактерий вида Serratia marcescens/ О.В.Кузнецова, Л.П.Пульчеровская, Д.А.Васильев, Е.О.Бахаровская Материалы международной научно-практической конференции. «Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения» Том 1, Ульяновск 2011. - с.154-155 .

7. Золотухин, С.Н. Выделение фагов бактерий рода Citrobacter из объектов внешней среды и патологического материала // С.Н.Золотухин, Л.П.Пульчеровская, Н.А. Кирьянова, Д.А. Васильев «Вестник УГСХА», Сборник научных трудов, Ульяновск, - 2002. - С. 29-32.

Код для цитирования: Скопировать