IX Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2017

Впервые родококки описал Zopf в 1889 году как аэробные актиномицеты, сочетающие свойства нокардий и микобактерий. Место рода Rhodococcus в современной классификации бактерий таково: тип Actinobacteria; класс Actinobacteria; порядок Actinomycetales; семейство Nocardiaceae; род Rhodococcus[2].

Rhodococcus spp – грамположительные, неподвижные, частично кислотоустойчивые палочки, кокки (коккобациллы) или обильно разветвленный вегетативный мицелий. Характерно наличие плеоморфизма. Отличительная черта исследуемых штаммов – трехстадийный морфогенетический цикл развития (кокки – палочковидные, нитевидные или ветвящиеся клетки – кокки). Растут на простых питательных средах. Колонии обычно окрашены в нежнорозовый, желтый, светложелтый, желтовато-коричневый, кремовый, оранжевый или красный цвет (встречаются и бесцветные варианты). Оптимальная температура для роста 30 °С, но возможен рост и в диапазоне от 10 °С до 40 °С. Колонии на среде, появляющиеся в среднем через 48 часов, круглые, чаще гладкие (могут быть и шероховатыми), полупрозрачные, блестящие или мукоидные. Характерный оранжево-розовый цвет может появиться только на 4–7-й день. На стандартных лабораторных средах при температуре 28 °С, pH 6,8–7,0 образуют колонии мягкой консистенции без воздушного мицелия с розовато-красным, палево-телесным или интенсивно желтым недиффундирующим пигментом [1, 2, 3].

Трехстадийный морфогенетический цикл развития зависит от условий роста и фазы цикла роста. Например, R. еqui растет в виде кокков на твердых средах при посеве из гнойного отделяемого, длинные палочки или короткие волокна с рудиментарными ветвлениями образует в жидких средах или при длительной инкубации. Морфогенетический цикл (в среднем 24 часа) начинается со стадии кокков или коротких палочек. Кокки могут перерастать в короткие палочки, образовывать нити с боковыми выростами и элементарным ветвлением, наиболее дифференцированные формы – сильно разветвленные гифы. Следующая генерация кокков или коротких палочек образуется в результате фрагментации палочек, нитей и гиф [1, 4].

Описанная морфологическая картина может изначально запутать и привести к ошибочному принятию родококка, выделенного из среды, за контаминацию дифтероидами, Bacillus spp или Micrococcus spp. Все родококки, выделенные из различных источников, образуют кислоту из глюкозы, фруктозы, глицерина и, как правило, маннозы, но не продуцируют ее из сорбозы, рамнозы, целлобиозы, дульцита и раффинозы. Они усваивают натриевые соли пировиноградной, фумаровой, уксусной, пропионовой и масляной кислот, но не усваивают натриевые соли щавелевой и винной кислот. Растут и образуют кислоты на арабинозе, галактозе, лактозе, мальтозе, сахарозе, инозите, a также усваивают натриевые соли α-кетоглутаровой, g-аминомасляной, лимонной, молочной, фенилуксусной и янтарной кислот.

Разложение тирозина и наличие уреазы являются видоспецифическими особенностями Rhodococcus spp. [1].

Были изучены морфологические, тинкториальные и некоторые биохимические свойства штамма Rhodococcus spp, полученного из коллекции МВКПМ.

Материалы и методы. Набор для окраски по Граму, среды Гисса, 0,7% мясопептонный агар, 1,2 % мясопептонный агар (ГРМ), мясопептонный бульон (ГРМ), 3% раствор перекиси водорода, 1 % раствор тетраметилпарафенилендиамина дигидрохлорида. световой микроскоп МБИ-3, бактериологическая петля, цифровая камера-окуляр для микроскопа модель DCM 130, термостат ТС 1/80 СПУ, штативы, пробирки, пробки, предметные стекла, вода дистиллированная, автоклав ВК-75, штамм B 3043 Rhodococcus spp., МВКПМ. Исследование проводили стандартными бактериологическими методами, многократно апробированном сотрудниками кафедры МВЭиВСЭ ФГБОУ ВО Ульяновской ГСХА [5-10].

Суточную бульонную культуру Rhodococcus spp. высеяли на мясопептонный агар (ГРМ), в пробирки со средами Гисса, полужидкий агар. Посевы культивировали при 30 ºС сутки, затем учитывали некоторые результаты: реакция сред Гисса, подвижность (рост в полужидком агаре), характер роста на мясопептонном агаре. Затем были поставлены по стандартным методикам тесты на определение способности продуцировать ферменты каталазу и оксидазу, приготовлен мазок и окрашен по Граму.

В результате проведенных исследований, установлено, что исследуемая культура Rhodococcus spp. каталазоположительная, оксидазоотрицательная (рисунок 1,2). Глюкозо-, лактозо-, сахарозо-, мальтозо-, сорбит-, инулин-, дульцит-отрицателная, маннит-положительная (рисунок 3). Штамм Rhodococcus sppнеподвижен, рост в полужидком ангаре локализуется строго в верхней части на поверхности среды, что говорит о том, что для данной культуры оптимальными являются аэробные условия (рисунок 4).

В мазке, окрашенном по Граму культура представлена грамотрицательными кокками, располагающиеся попарно и одиночно. Так как мазок был приготовлен с 24-х часовой агаровой культуры, можно предположить, что эта первая стадия морфогенетического цикла развития Rhodococcus spp.

Рисунок 1 – Результат постановки теста на наличие ферментов оксидазы и каталазы	Рисунок 2 - Результат определения ферментативных свойств Rhodococcus sppна средах Гисса

На мясопептонном агаре через сутки культивирования образует мелкие россинчатые колонии, глянцевые, розового цвета, мажущейся консистенции (рисунок 5).

Рисунок 4 Результат определения подвижности Rhodococcus spp	Рисунок 5 – Рост штамма Rhodococcus spp. на мясопептонном агаре

Выводы: в результате проведенной работы, установлено, что штамм Rhodococcus spp. по исследуемым культуральным, морфологическим, тинкториальным и биохимическим свойствам в целом, является типичным представителем рода Rhodococcus spp., за исключением отсутствия способности продуцировать фермент глюкозофосфатизомеразу.

Список используемых источников:

1. Ившина И.Б. Бактерии рода Rhodococcus (иммунодиагностика, детекция, биоразнообразие) Автореферат докт. дисс. Пермь; 1997 г.

2. Бадиков В.Д., Беспалова Г.И. Аэробные (факультативно-анаэробные) грамположительные палочки. Классификация и номенклатура. Учебное пособие для врачей – СПб.: ART-Xpress, 2009: С. 50-52.

3. Weinstock D.M., Brown A.E. Rhodococcus equi : An emerging pathogen. Clin Infect Dis 2002; 34:1379-85

4. Бадиков В.Д., Беспалова Г.И. Аэробные (факультативно-анаэробные) грамположительные палочки. Морфологические и культуральные свойства. Учебное пособие для врачей - СПб.: ART-Xpress. - 2009. - с. 65-70.

5. Садртдинова Г.Р. Сравнительная эффективность методов выделения бактериофагов Klebsiellaoxytoca/ Г.Р. Садртдинова, Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин/ Вестник Ульяновской сельскохозяйственной академии.-№4 (32).- С.68-72.

6. Садртдинова Г.Р. Выделение бактериофага бактерий Klebsiellaoxytoca под действием рентгеновского облучения/ Г.Р.Садртдинова, Д.А.Васильев, С.Н.Золотухин // Вестник Ульяновской сельскохозяйственной академии.-№1 (33).- С.76-81.

7. Ефрейторова Е.О., Пульчеровская Л.П., Васильев Д.А. Изучение биологических свойств бактерий serratia marcescen выделенных из пищевых продуктов и объектов окружающей среды / Научный вестник Выпуск №13.г. Дмитровград. Технологический институт филиал ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А.Столыпина» С. 175-180

8. Пульчеровская Л.П. Индикация бактерий рода Citrobacter с помощью реакции нарастания титра фага (РНФ)/ Л.П.Пульчеровская, С.Н.Золотухин, Д.А.Васильев// Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. – 2013. – № 1(21). – С. 60 – 64.

9. Кузнецова, О.В. Изучение биологических свойств бактерий вида Serratia marcescens/ О.В.Кузнецова, Л.П.Пульчеровская, Д.А.Васильев, Е.О.Бахаровская Материалы международной научно-практической конференции. «Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения» Том 1, Ульяновск 2011. - с.154-155 .

10. Золотухин, С.Н. Выделение фагов бактерий рода Citrobacter из объектов внешней среды и патологического материала // С.Н.Золотухин, Л.П.Пульчеровская, Н.А. Кирьянова, Д.А. Васильев «Вестник УГСХА», Сборник научных трудов, Ульяновск, - 2002. - С. 29-32.

Код для цитирования: Скопировать