IX Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2017

В нашей стране разработкой методов диагностики, лечения и профилактики бордетеллеза практически не занимаются. Тогда как болезнь представляет реальную угрозу для домашних животных и человека [1-25].

Методы лабораторной диагностики бордетеллёза собак и кошек не разработаны, что создает сложность в современной и точной диагностике заболевания. Для разработки бактериологических схем и методов идентификации возбудителя возникает необходимость создания селективной среды. В решении задачи поиска селективного компонента изучение антимикробной чувствительности Bordetellabronchisepticain vitro имеет важное значение [1, 7].

В настоящее время для лечения бордетеллёза домашних животных в зарубежной ветеринарной практике в основном применяют антимикробные препараты [1, 2, 3, 5]. Множество антибиотиков против B bronchiseptica предложено на основе опытов, проведенных in vitro. При этом на лицо существенное различие результатов исследований различных авторов, по-видимому, из-за применения различных методик и вариантов штаммов [1, 4, 12]. Общие черты антибиотикочувствительности изолятов B. Bronchiseptica, по данным различных авторов, всё же просматриваются. Вещества пеницеллинового ряда (тикарциллин, пиперрациллин, азлоциллин) и аминогликозиды (канномицин, гентамицин, амикоцин, тобрамицин), хлорамфеникол, тетрациклин, цефалоспорины (ципрофлоксацин, энрофлоксацин) и полимиксины in vitro эффективны против большинства изолятов [1, 2, 5]. Изоляты B. bronchiseptica, устойчивы к пенициллину, нитрофуранам, стрептомицину и ко многим препаратам из нового поколения цефалоспоринов (цефтаксиму, цефтиофуру) [12, 14]. Не всегда устойчивы к ампициллину, карбеницилину, цефалотину, сульфанамиду, триметоприму и эритромицину [1, 5].

Целью нашего исследования явилось изучение антимикробной чувствительности Bordetellabronchisepticain vitro с целью поиска селективных компонентов для конструирования селективной среды и выявления наиболее эффективных средств химиотерапии при бордетеллёзе домашних животных.

Материалы и методы. Работа проводилась в научно - исследовательском инновационном центре по микробиологии и биотехнологии (НИИЦМиБ) кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ВСЭ Ульяновской ГСХА.

Для определения чувствительности изолятов B.bronchisepticaк антимикробным средствам использовали общепринятый метод бумажных дисков [16]. Бордетеллы культивировали при температуре 36-37С на питательных средах: МПА, BACTO PPLO агаре и бордетеллагаре. В процессе роста формировались слегка выпуклые, с ровными краями, прозрачные, блестящие колонии. Затем изучали чувствительность бордетелл к 24 антимикробным препаратам, относящимся к различным группам антибиотиков, фунгицидным и нитрофурановым препаратам.

Результаты исследований. Данные восприимчивости B. bronchiseptica к исследуемым антимикробным агентам представлены в таблице 1.

Результаты наших исследований имеют некоторые расхождения с данными литературных источников, но общая картина антимикробной чувствительности B. bronchiseptica типична для грамотрицательного микроорганизма.

Аминогликозиды (неомицин, мономицин, гентамицин) высоко эффективный in vitro против B. bronchiseptica, при этом стрептомицин достаточно малоэффективен, а антибиотики групп макролидов (эритромицин, олеандомицин), пенициллина (пенициллин, оксацилин, ампицилин) и линкомицина абсолютно неэффективны.

Нами зарегистрирован высокий уровень устойчивости к нитрофуранам (фурадипан) и противогрибковым препаратам (нистатин, клотримазол). Следовательно, данные средства могут быть использованы в качестве селективных компонентов при разработке среды.

Но основное внимание при выборе селективного компонента, по нашему мнению, должно уделяться антибиотикам цефалоспоринового ряда. Результаты, проведённых нами исследований показали высокую эффективность цефоперазона и цефотоксина, в то время как к цефазолину чувствительность отсутствовала.

Таблица 1.

Чувствительность B. bronchiseptica к антимикробным средствам

№ п/п	Антимикробное средство	Чувствительность бордетелл (+ или -)	Зона лизиса (мм)
	Цефазолин	+	10
	Цефалотин	-	-
	Цефоперазон	+	17
	Цефотоксин	+	15
	Офлоксоцин	+	29
	Ципрофлоксацин	+	40
	Неомицин	+	25
	Мономицин	+	27
	Гентамицин	+	33
	Эритромицин	-	-
	Олеандомеидин	-	-
	Линкомицин	-	-
	Левомицетин	+	25
	Стрептомицин	+	7
	Тетрациклин	+	17
	Токсициклин	+	22
	Оксацилин	-	-
	Ампициллин	-	-
	Пенициллин	-	-
	Фурадипан	-	-
	Нистатин	-	-
	Клотримазол	-	-
	Ванкомицин	-	-
	Амфотерицин	-	-

К ципрофлоксацину и офлоксацину бордетеллы проявили в наших исследованиях наивысшую чувствительность. Тогда как по литературным данным эти препараты для терапии больных животных эффективны только при введении внутривенно или в высоких дозировках.

Выводы и предложения. Таким образом, при выборе компонентов для конструирования селективной среды следует руководствоваться результатами антимикробной чувствительности исследуемых изолятов.

Применение антимикробных средств против устойчивых бордетелл должно осуществляться строго после определения антибиотикочувствительности выделенных штаммов микроорганизмов.

Литература

1. Васильев Д.А. Бордетеллёз животных: характеристика заболевания и возбудителя, разработка методов диагностики / Д.А. Васильев, Ю.Б. Васильева, А.В. Мастиленко, Д.Г. Сверкалова, Е.Н. Семанина, О.Ю. Борисова, С.Н. Золотухин, И.Г. Швиденко И.Г. - Ульяновск, 2014.

2. Васильев Д.А. Индикация Bordetella bronchiseptica из объектов внешней среды и клинических образцов / Д.А. Васильев, Ю.Б. Васильева, Е.Н. Семанина, Е.Г. Семанин / Материалы V Международной научно-практической конференции «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения». Ульяновская ГСХА - 2013. - С. 18-22.

3. Васильева Ю.Б. Алгоритм использования тecт-cистемы индикации и идентификации бактерий B. bronchiseptica / Ю.Б. Васильева, А.В. Мастиленко, Д.А. Васильев, Р.Р. Бадаев, С.В. Мерчина, И.Г. Швиденко, Е.И. Суркова / Современные проблемы науки и образования. - 2014. - № 5. - С. 606.

4. Васильева Ю.Б. Биотехнологический подход в разработке метода идентификации Bordetella bronchiseptica / Ю.Б. Васильева, Д.А. Васильев, Е.Н. Семанина, Е.Г. Семанин / Материалы V Международной научно-практической конференции. Ульяновская ГСХА «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения». - 2013. - С. 15-18.

5. Васильева Ю.Б. Детекция бактерий Bordetella bronchiseptica в мультиплексной полимеразно-цепной реакции / Васильева Ю.Б., Мастиленко А.В., Семанин А.Г., Скорик Д.С., Суркова Е.И. / Сборник статей «Аграрная наука - сельскому хозяйству». - 2014. - С. 253-257.

6. Васильева Ю.Б. Наборы для детекции бактерий вида В. Bronchiseptica / Ю.Б. Васильева, А.В. Мастиленко, Д.А. Васильев, А.Г. Семанин, Е.И. Суркова, А.С.Скорик, А.Н. Пирюшова, Н.Р. Уралов / Материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 55-летию ВНИИВВиМ «Актуальные в опросы контроля инфекционных болезней животных». - 2014. - С. 48-53.

7. Васильева Ю.Б. Разработка методов выделения и селекции бактериофагов Bordetella bronchiseptica / Ю.Б. Васильева, Д.А. Васильев, Е.Н. Семанина / Материалы Международной научно-практической конференции «Бактериофаги: теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности». - 2013. С. 28-32.

8. Васильева Ю.Б. Технология конструирования диагностического биопрепарата на основе бактериофагов Bordetella bronchiseptica и перспертивы его применения / Ю.Б. Васильева, Д.А. Васильев, Е.Н. Семанина / Материалы Международной научно-практической конференции «Бактериофаги: теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности». - 2013. - С. 99-103.

9. Васильева Ю.Б. Эффективность иммунохимических методов для анализа антигенного состава Bordetella bronchiseptica / Ю.Б. Васильева // Фундаментальные исследования. - 2013. - № 10-1. - С.100-104.

10. Васильева Ю.Б. Эпизоотология и инфекционные болезни животных / Васильева Ю.Б., Богданов И.И. – Ульяновск. - 2015. – 25 с.

11. Ломакин А.А. Чувствительность к антимикробным средствам бактерий вида Bordetella bronchiseptica / А.А. Ломакин, А.В. Мастиленко, Ю.Б. Васильева / Материалы I международной научно-практической конференции «Фундаментальные и прикладные исследования по приоритетным направлениям биоэкологии и биотехнологии». - 2014. - С. 144-147.

12. Мастиленко А.В. Подбор праймеров для выявления генов бактерий вида Bordetella bronchiseptica / А.В. Мастиленко, Ю.Б. Васильева, Н.А. Феоктистова / Материалы I международной научно-практической конференции «Фундаментальные и прикладные исследования по приоритетным направлениям биоэкологии и биотехнологии». - 2014. - С.109-112.

13. Мастиленко А.В. Разработка методики серологической идентификации Bordetella bronchiseptica с помощью иммуноэлетрофореза / А.В. Мастиленко, Д.Г. Сверкалова, Е.Г. Семанин, Ю.Б. Васильева / Материалы III-й Международной научно-практической конференции молодых ученых «Молодежь и наука XXI века». - 2010. - С. 47-49.

14. Мастиленко А.В. Разработка протокола проведения ПЦР для детекции бактерий вида Bordetella bronchiseptica / А.В. Мастиленко, Ю.Б. Васильева, Н.А. Феоктистова / Материалы I Международной научно-практической конференции «Фундаментальные и прикладные исследования по приоритетным направлениям биоэкологии и биотехнологии». - 2014. - С. 113-116.

15. Мастиленко А.В. Определение эффективности разработанных зондов в реакции ОТ-ПЦР для повышения специфичности выявления Bordetella bronchiseptica / А.В. Мастиленко, Д.А. Васильев, Ю.Б. Васильева, Д.Г. Сверкалова // - Инфекция и иммунитет. - 2013. - Т.3. - № 2. - С.152.

16. Методические указания по определению чувствительности к антибиотикам возбудителей инфекционных болезней сельскохозяйственных животных. М., 1981.

17. Никульшина Ю.Б. Выделение бактерий рода Bordetella brovchiseptica от домашних животных / Ю.Б. Никульшина, Д.Г. Сверкалова, Е.Н. Никулина, Д.Н. Хлынов / Материалы Международной научно-практической конференции «Роль молодых ученых в реализации национального проекта "Развитие АПК"». - 2007. - С. 281-284.

18. Никульшина Ю.Б. Культивирование Bordetella bronchiseptica на различных селективных средах / Ю.Б. Никульшина, Д.А. Сверкалова, А.В. Мастиленко, Д.Н. Хлынов, Д.А. Васильев / Материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 65-летию Ульяновской ГСХА «Актуальные вопросы аграрной науки и образования». - 2008. - С. 57-59.

19. Никульшина Ю.Б. Разработка методов индикации и идентификации Bordetella bronchiseptica, выделенных у домашних животных / Ю.Б. Никульшина, Д.Г. Сверкалова, Е.Н. Никулина // Ветеринарная патология. - 2007. - № 4. - С. 103-106.

20. Пирюшова А.Н. Особо опасные инфекции из-за рубежа / А.Н. Пирюшова, Ю.А. Журавкова, Ю.Б. Васильева / Студенческий научный форум. – 2015. - VII Международная студенческая электронная научная конференция, электронное издание. 2015.

21. Райчинец Ю.А Методика выделения Paenibacillus larvae / Ю.А. Райчинец, Н.А. Феоктистова, М.А. Лыдина, Р.Р. Бадаев, Д.А. Васильев, Ю.Б. Васильева, С.В. Мерчина, И.Г. Швиденко / Современные проблемы науки и образования. - 2014. - № 5. - С. 599.

22. Сверкалова Д.Г. Создание транспортной и накопительной сред для Bordetella bronchiseptica / Д.Г. Сверкалова, А.В. Мастиленко, Д.Н. Хлынов, Ю.Б. Никульшина, Д.А. Васильев / Материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 65-летию Ульяновской ГСХА «Актуальные вопросы аграрной науки и образования». - 2008. - С. 134-136.

23. Семанин А.Г. Анализ распространения бордетеллеза домашних животных / А.Г. Семанин, А.С. Скорик, Е.И. Суркова, Ю.Б. Васильева, О.Н. Марьина / Студенческий научный форум – 2014. - VI Международная студенческая электронная научная конференция: Электронное издание. 2014.

24. Семанин А.Г. Комплексный биопрепарат на основе фагов / А.Г. Семанин, Е.И. Суркова, А.С. Скорик, Ю.Б. Васильева / Материалы I-й международной научно-практической конференции «Фундаментальные и прикладные исследования по приоритетным направлениям биоэкологии и биотехнологии». - 2014. - С. 79-82.

25. Семанин А.Г. Разработка селективной добавки для выделения возбудителя респираторной инфекции / А.Г. Семанин, Ю.Б. Васильева, А.В. Загуменнов, Е.Б. Мухин / Знания молодых для развития ветеринарной медицины и АПК страны 2015. - С. 196-197.

Код для цитирования: Скопировать