IX Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2017

Уровни содержания в травяных чаях, предназначенных для выпуска в обращение на таможенной территории Таможенного союза, токсичных элементов, потенциально опасных веществ, микотоксинов, антибиотиков, пестицидов, радионуклидов, микроорганизмов и значения показателей окислительной порчи не должны превышать уровней, установленных в приложениях № 1-4 к техническому регламенту Таможенного союза «О безопасности пищевой продукции» (ТР ТС 021/2011) [11].

Сначала мы прошли инструктаж по технике безопасности на рабочем месте, о чем сделали роспись в соответствующем журнале, а только затем занялись приготовлением питательных сред в бактериологической кухне и приготовление лабораторной посуды с использованием сушильного шкафа и автоклава.

Определение КМАФАнМ (количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов) в инстантных травяных чаях проводили методом глубинного посева первичных разведений в объеме 1 см³ в стерильные чашки Петри с дальнейшей заливкой теплым мясо-пептонным агаром. Посевы ставили в термостат после того, как мясо-пептонный агар застынет в перевернутом виде при температуре 30±1 °С на 72 часа.

Далее подсчитывали число выросших на чашке колоний. Для этого чашку делили маркером на 4 сектора и подсчитывали количество выросших колоний на каждом секторе и в дальнейшем умножали на 4. КМАФАнМ в 1 см³ (в 1 г) находили по формуле:

X = n x l0^m(1),

где n - количество выросших на 1 чашке Петри колоний;

m - число десятикратных разведений.

Результаты исследований представлены в таблицах 1 и 2.

Бактерии группы кишечной палочки (БГКП) также обязательный показатель, определяемый при санитарно-микробиологическом исследовании в инстантных травяных чаях. Для посева продукта на бактерии группы кишечных палочек использовали среду Кесслер, куда вносили 5 см³ испытуемого разведения инстантного травяного чая, затем помещали в термостат при 37 °С на 24 ч. Известно, что при росте БГКП в среде Кесслера образуется газ. Результаты исследования отражены в таблицах 1 и 2.

Для обнаружения бактерий родаSalmonella 25 г инстантного травяного чая вносили в 100 см³ среды Кауфмана и ставили в термостат при температуре 37 °С на 24 ч. Через сутки мы делали пересев на среду Эндо газоном. Посевы также культивировали в течение 24часов при температуре 37 ⁰С. Известно, что на среде Эндо бактерии родаSalmonella растут в виде бесцветных или розовых прозрачных колоний.

Результаты исследования отражены в таблицах 1 и 2.

Оценка санитарно-микробиологических показателей качества в инстантных травяных чаях подтвердила их высокое качество при определении показателей микробной чистоты. Было выявлено отсутствие в пробах патогенных бактерий, в том числе и родаSalmonella, бактерий группы кишечной палочки, количество мезофильных аэробных и факультативных анаэробных микроорганизмов находится в пределах нормативов, что еще раз подтвердило положительные результаты органолептического анализа.

Таблица 1 –Санитарно-микробиологические показатели качества

Наимено вание показате ля	Норматив показателя	Торговая марка травяного чая
		AHMAD TEA (London) с мятой	Принцесса «НУРИ» с корицей	Greenfield «Christ mas mystery»	AHMAD TEA (London) с шиповником	Lipton с шиповником
БГКП (коли-формы), КОЕ	1х103	0,1х103	0,4х103	0,2х103	0,5х103	0,4х103
КМАФАнМ, КОЕ/г, не более	1х107	0,7х107	0,2х107	0,3х107	0,9х107	0,6х107
Бактерий родаSalmonella, КОЕ	Не допускается в 25 г

Таблица 2 – Санитарно-микробиологические показатели качества

Наимено вание показате ля	Норматив показателя	Торговая марка травяного чая
		AHMAD TEA с ромашкой	Принцесса «Ява» с жасмином	Curtis «Oolong Emotion»	Curtis «Berries Fest»	NADIN «Завтрак на траве»
БГКП (коли-формы), КОЕ	1х103	0,2х103	0,3х103	0,6х103	0,7х103	0,1х103
КМАФАнМ, КОЕ/г, не более	1х107	0,1х107	0,2х107	0,3х107	0,9х107	0,6х107
Бактерий родаSalmonella, КОЕ	Не допускается в 25 г	Не обнаружено

Известно, что технология производства чая «заставляет» бактериальную клетку образовывать спору, с последующей длительной лаг-фазой для прорастания. Поэтому, первоначально каждая навеска была подвергнута термостатированию при 37⁰С в течение 10-18 часов для перехода споровой формы искомых бактерий в вегетативную (соотношение 1:10 в среде обогащения ((Claus, 1955)). В 100 см³ дистиллированной воды растворяли 10 г KNO₃, 5 г пептона, 3 г мясного экстракта. Устанавливали рН 7,0, разливали в пробирки по 9 мл. стерилизовали при 120°С 15 минут.

Далее из предварительно «подрощенного» материала делали ряд последовательных десятикратных разведений: 10^-1, 10^-2, 10^-3, 10^-4. 1 мл разведения высевался на чашку Петри при добавлении 9 мл мясо-пептонного агара с глюкозой и дрожжевым экстрактом температурой 38-42⁰С и производили посев штрихом на среду Донована, которую готовили без добавления полимиксина. Посевы культивировали в условиях термостата в течение 18 часов. Результаты исследований представлены в таблице 3 и показывают, что количество БВППП в исследованных пробах травяного инстантного чая изменяется в пределах от 2,2х10³КОЕ/г до 5,7х10⁵КОЕ/г.

Таблица 3 – Количество бактерий, выделенных из травяного инстантного чая

Название пробы	Количество БВППП, КОЕ/г	Название пробы	Количество БВППП, КОЕ/г
AHMAD TEA (London) с мятой	6,4х104±0,5х104	AHMAD TEA с ромашкой	3,1х104±0,5х104
Принцесса «НУРИ» с корицей	5,7х105±0,5х105	Принцесса «Ява» с жасмином	2,2х103±1,3х103
Greenfield «Christ mas mystery»	0,9х105±0,3х105	Curtis «Oolong Emotion»	4,6х103±0,7х103
AHMAD TEA (London) с шиповником	3,5х104±0,2х104	Curtis «Berries Fest»	6,8х104±0,3х104
Lipton с шиповником	3,9х103±0,8х103	NADIN «Завтрак на траве»	1,4х104±1,1х104

С чашек Петри было взято для дальнейших исследований по 1-2 типичных для изучаемых бактерий колонии. Выделение «чистой культуры» проводили по методу Дригальского.

У выделенных культур были изучены тинкториальные свойства. Установлено, что все выделенные бактерии – это крупные грамположительные палочки, расположенные цепочками или попарно, кислотоустойчивые. Затем изучаемые культуры были сгруппированы по культуральным свойствам (рост на жидкой и плотной питательных средах) в условные группы, описанные в таблице 4.

Следующий этап исследований был посвящен изучению биохимических свойств выделенных культур. Для типирования мы применяли ключ R.A. Slepecky, H.T. Hemphill, разработанный для первичной дифференциации бактерий родов BacillusиPaenibacillus(табл.5).

Алгоритм применения ключа: при положительном или результате определения какого-либо биохимического свойства следующий этап, рекомендованный авторами, обозначен арабской цифрой по горизонтали и отражен буквенным обозначением по вертикали. Заключительным этапом дифференциации по ключу служит название вида микроорганизма.

Таблица 4 – Культуральные свойства выделенных бактерий рода Bacillus

тип колоний	Характерные культуральные свойства			Количество выделенных культур одного типа
	особенности роста на мясо-пептонном агаре с глюкозой и дрожжевым экстрактом	особенности роста на мясо-пептонном бульоне
тип 1 (условная группа B. cereus)	Колонии плотной консистенции, белые, восковидные, круглые	Среда мутная, осадок трудноразбиваемый, крошковатый, прочные пленка и пристеночное кольцо. При образовании пленки среда просветляется/	4
тип 2 (условная группа B.megaterium)	Колонии слизистые, желтовато-белые	Растет в виде осадка на дне пробирки с помутнением среды	1
тип 3 (условная группа B.pumilus)	Толстые матово-белые морщинистые колонии	Бульон остается почти прозрачным, на поверхности среды морщинистая пленка	2
тип 4 (условная группа B.mycoides)	Войлоковидные наложения, ползущие по поверхности среды	Помутнения среды нет, на дне ватообразный осадок, пленки не образует	2
тип 5 (условная группа B.subtilis)	Колонии белые или сероватые, морщинистые	Бульон мутный, при образовании пленки среда просветляется	1

 

Ресуспендирование материала в МПБ

Подготовка исследуемого материала в соответствии с НТД

5 ч 24 ч 5 ч 25 ч

 

 

21 час

 

 

Прогревание в течение 30 минут при 70-75 ⁰ С и пересев на МПА

 

 

Прогревание в течение 45 минут при 80 ⁰С и пересев на среду Донована без полимиксина и мясо-пептонного агара с глюкозой и дрожжевым экстрактом

 

 

Пересев на мясо-пептонный бульон и культивирование в условиях термостата

 

 

8 часов

 

 

Фагоиденфикация методом «стекающая капля»

Среда Гаузе № 2, среда Громыко, МПА

 

 

Окраска по Граму, пересев на МПБ, инкубированиев термостате

 

 

Учет результатов по наличию или отсутствию дорожек лизиса на газоне исследуемой культуры

 

 

24 ч 24 ч

Среда Кларка,

МПБ+7 % NaCl,

1% глюкозный агар, картофельный агар,

среда с мочевиной,

молочный агар,

тирозиновый агар,

МПА, кукурузно-петонный агар, среда Омелянского с глюкозой, МПБ с индикаторными бумажками на сероводород, индол и аммиак

мясо-пептонный желатина,

МПБ с яичным желтком, МПБ с нитратами в анаэростате

 

Итого: 29 часов (I)

 

Постановка реакции на каталазу, Фогес-Проскауер; рост при 50 и 65 °С; гидролиз крахмала; рост в анаэробных условиях, образование кислоты и газа из глюкозы, микроскопия мазка (ширина палочки 1.0μm или больше), рост в 7 % NaCl, разложение казеина, рост при рН

Код для цитирования: Скопировать