Высотин С.А.
1, Боталов Н.С.
2
1Пермский государственный медицинский университет
2Пермский Государственный Медицинский Университет им. акад. Е.А. Вагнера
Метод полимеразной цепной реакции основан на ферментативной амплификации выбранных специфических участков генома бактерий рода Mycobacterium tuberculosis, M. bovis, M. africanum, M. microti, их дальнейшей детекции и идентификации. Аналитическая чувствительность метода очень высока и составляет 1-10 бактериальных клеток. ПЦР можно использовать не только для обнаружения генетического материала возбудителя туберкулеза, но и для определения резистентности этого штамма к противотуберкулезным препаратам. Возрастающее число мультирезистентных штаммов
M. tuberculosis представляет собой серьезную проблему для современного здравоохранения. Лечение пациентов, инфицированных мультирезистентными штаммами, требует применения более токсичных и дорогостоящих химиопрепаратов, длительной госпитализации и, тем не менее, часто остается неэффективным, обуславливая высокий удельный вес инвалидизации и смертности. Кроме того регистрируют заболевания, вызванные нетуберкулезными микобактериями (микобактериозы) со сходной с туберкулезом клинико-рентгенологической картиной. Вследствие этого больные микобактериозоми получают не показанные им химиопрепараты, к которым потенциально патогенные микобактерии имеют резистентность. Основным в решении этой проблемы является своевременная детекция мультирезистентных штаммов на ранних стадиях заболевания, которая позволит контролировать дальнейшее распространение конкретного выявленного штамма и подобрать оптимальную схему химиотерапии.[2,4]. Исследования показывают наличие множественной лекарственной устойчивости, устойчивости МБТ к двум основным противотуберкулезным препаратам – изониазиду и рифампицину одновременно (независимо от наличия резистентности к другим препаратам). Регистрируется и экстенсивная или широкая лекарственная устойчивость – множественная лекарственная устойчивость в сочетании с устойчивостью к фторхинолонам и к одному из группы инъекционных препаратов: канамицину, амикацину, капреомицину. Лечение при таком виде устойчивости туберкулеза крайне трудно.[3]. Определяют также экстремальную или абсолютную лекарственную устойчивость – устойчивость ко всем противотуберкулезным препаратам. Выявляют и такое явление, как перекрестная лекарственная устойчивость, при которой возникновение устойчивости к одному препарату влечет за собой устойчивость к другим. Она обусловлена сходством химической структуры некоторых противотуберкулезных препаратов.
Показано, что у 90-98% устойчивых штаммов резистентность связана с мутациями в гене rpoB, который кодирует бета-субъединицу ДНК-зависимой РНК-полимеразы . 95-98% Мутаций в rpoB расположено в коротком участке 81 пн, при этом более 85% мутаций выявлено в трех кодонах 516, 526, 531. Применяемые в настоящее время многочисленные методы для определения мутаций в rpoB либо определяют факт их наличия, либо выявляют конкретные мутации, и при этом золотым стандартом остается прямое секвенирование ДНК. При отсутствии мутаций в данном кодоне происходит кодон - зависимая аллель - специфическая амплификация фрагмента гена rpoB, наличие мутации в позиции, соответствующей 3'-концу праймера, ведет к неспариванию праймера и матрицы и неспособности полимеразы к синтезу комплементарного фрагмента. Таким образом, наличие мутации приводит к отсутствию индикаторного фрагмента. Одновременно проводится три реакции ПЦР, направленные на все три кодона: 516, 526, 531.[1]
Проводимые исследования показывают многообразие механизмов резистентности микобактерий к химиопрепаратам и особую ценность молекулярно-генетических методов для определения этого явления.
Список литературы
-
Бочкарев Е.Г., Денисова Т.С., Генерозов Э.В., Говорун В.М., Никитченко Е.Ю., Черноусова Л.Н., Кузнецов П.В. Генодиагностика во фтизиатрии-М. 2000г. - С.1-15
-
Баженов И.Л., Канина А.О., Тукачёва О.В., Быкова Л.П., Годовалов А.П. Анализ заболеваемости туберкулезом среди ВИЧ-инфицированных города Краснокамска // Успехи современного естествознания. – 2011. – № 8. – С. 91-92
-
О санитарно-эпидемиологической обстановке в Российской Федерации в 2009 году. Государственный доклад. – M.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2010. – С. 456.
-
Струков Л.А, Парфенов И.А. Своевременная диагностика устойчивости к антибиотикам методом ПЦР /ООО НПФ «Литех», М//XVIII Всероссийская научно-практическая конференция «Аналитическая надежность и диагностическая значимость лабораторной медицины» - М.: 2013г. – С. 1-21