IX Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2017

Актуальность исследования. Проблемы микробиологической диагностики гнойно-воспалительных заболеваний, связанные с возможностью потери нестойких возбудителей на долабораторном этапе, остаются актуальными для современной медицины [2]. В целях сохранения численности и жизнеспособности микробов на этапе транспортировки материала (от постели больного до лаборатории) в лечебной практике широко используются транспортные среды (чаще всего, среда Amies) [3]. Считается, что их состав подобран таким образом, что среды предупреждают гибель микробных клеток, сохраняют их жизнеспособность, но при этом не способствуют росту и размножению. Последнее очень важно при необходимости количественного учета присутствующих в клиническом материале микробов, когда их концентрация имеет диагностическое значение. Однако, поскольку среди гноеродных микроорганизмов имеются как весьма устойчивые во внешней среде (например, стафилококки, энтеробактерии), так и очень чувствительные к внешним воздействиям (стрептококки) варианты, создание универсальной транспортной среды представляется весьма трудной задачей. Поэтому врачам-клиницистам, как и специалистам-бактериологам важно представлять реальные показатели выживаемости основных клинически значимых микробов в транспортных средах.

Цель настоящей работы - определение уровней выживаемости микробных культур в транспортной среде Amies.

Материалы и методы. В эксперименте использовали культуры 7 видов:

- Staphylococcus aureus;

- Streptococcus pyogenes;

- Enterococcus faecalis;

- Escherichia сoli;

- Pseudomonas aeruginosa;

- Acinetobacter lwoffi;

- Candida albicans.

Все культуры имели клиническое происхождение и были выделены из биоматериала от пациентов детского соматического стационара. Из суточных культур указанных микроорганизмов готовили взвеси в физиологическом растворе с помощью стандарта мутности № 0.5 по МакФарланду. В полученные взвеси погружали тампоны из наборов транспортной среды Amies на 10 сек., моделируя процесс забора материала, после чего тампоны вносили в транспортную среду [3]. Пробирки со средой Amies хранили при комнатной температуре до 2-х суток. Концентрацию жизнеспособных микроорганизмов, сохранившихся в тампонах, оценивали в следующие сроки:

- непосредственно после постановки;

- через 1 час;

- через 24 часа;

- через 48 часов.

Для этого извлекали тампон из среды, энергично прополаскивали его в стандартном количестве физиологического раствора (1 мл), после чего готовили последовательные десятикратные разведения получившейся взвеси в стерильном физиологическом растворе до 10^-5 включительно. Из каждого разведения производили количественные высевы на питательный либо кровяной агар капельным методом [1]. Посевы инкубировали 24 часа, после чего подсчитывали количество выросших колоний. Исходя из этих показателей, вычисляли количество выживших клеток в пробирке с транспортной средой. Эксперименты с каждой из культур выполняли в 3-х повторностях.

Результаты и обсуждение. Прежде всего, при анализе результатов исследования мы оценивали пары показателей: сразу после постановки - через 1 час. Во всех экспериментах внутри этих пар различия не превышали 40%, что свидетельствовало, на наш взгляд, об адекватности избранного методологического подхода и позволяло считать результаты эксперимента в целом достоверными. При анализе последующей динамики концентрации микроорганизмов на тампонах при их хранении в среде Amies было выяснено, что концентрация большинства изученных культур существенно возрастает уже через 24 часа, а тем более - через 48 часов по сравнению с исходной. Так, прирост концентрации в 1,5-2 раза после 24 часов пребывания в среде Amies мы наблюдали у культур St.aureus, E.сoli, Ent. faecalis, Ps.aeruginosa, A. lwoffi и C. albicans. Эту динамику трудно связать с сохранением запаса энергетических и пластических субстратов в микробных клетках или растворе, поскольку в эксперименте использовали суточные агаровые культуры (то есть, находящиеся в поздней стационарной фазе), а для приготовления микробных взвесей применяли физиологический раствор. Через 48 часов повышение концентрации в 3-4 раза отмечено у культур St.aureus, Ent. faecalis, Ps.aeruginosa, A. lwoffi. Культуры E.сoli и C. albicans размножались еще более энергично, поэтому их показатели отличались от исходных более чем в 10 раз. Что же касается культуры Str.pyogenes, то ее исходная концентрация сохранялась лишь в течение 1-го часа, после чего содержание жизнеспособных бактерий резко падало и составляло через сутки менее 1% от исходного.

Безусловно, проведенное исследование является модельным, и его результаты следует осторожно переносить в реальные условия клинической микробиологии. Однако, если даже взвеси культур в физиологическом растворе способны давать существенный прирост своей концентрации при пребывании в транспортной среде, то при внесении в транспортную среду трофических компонентов (белки, полисахариды, клеточный детрит и т.п.), неизбежно присутствующих в биоматериале, результаты могут оказаться еще более неожиданными.

Выводы:

1. Длительное хранение микробных культур в транспортной среде Amies способно приводить к существенным изменениях их концентрации. Так, виды, характеризующиеся высокой устойчивостью во внешней среде и нетребовательностью к питательным средам, способны размножаться в транспортной среде Amies.

2. Жизнеспособность культуры Str.pyogenes сохраняется в транспортной среде Amies в течение нескольких часов, а к 24 часам хранения концентрация микроба резко падает.

3. Для эффективной и достоверной микробиологической диагностики даже при использовании транспортных сред необходима оперативная доставка биоматериала в лабораторию. Только в этом случае можно получить достоверные, неискаженные результаты.

Литература.

1. Маслов Ю.Н., Одинцова О.В. Экономичный метод количественного учета микроорганизмов // Пермский медицинский журнал, 1997. - № 1. - С. 99.

2. Маслов Ю.Н., Пегушина О.Г., Суханов С.Г., Фельдблюм И.В. Михайлова Т.И. Актуальные проблемы инфекции в кардиохирургии // Внедрение инновационных технологий в хирургическую практику (фундаментальные и прикладные аспекты). Международная дистанционная научно-практическая конференция. Пермь, 2010.

3. МУ 4.2.2039-05 Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории.

Код для цитирования: Скопировать