VIII Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2016

Кармановский рыбхоз был основан в 1980 году и на сегодняшний день является самым крупным в России индустриальным рыбным хозяйством. Хозяйство находится в Краснокамском районе республики Башкортостан, село Николо-Берёзовка. Объем выращивания рыбы достигает рекордных показателей — 1000-1200 т карпа, 100-150 т осетровых, 100-150 т форели. Также осуществляется разведение других видов рыб: золотая форель, белый амур, американский сом и толстолобик. На рыбхозе выращивают несколько пород осетровых — ленский, байкальский, русский, амурский, бестер и стерлядь.

Целью нашей работы явилось определить пригодность воды к использованию для рыбохозяйственных целей.

Задачами нашей работы явилось:

1. Изучить общие сведения о водоеме;

2. Изучить способы отбора проб;

3. Определить температуру воды;

4. Определить пенистость воды;

5. Определить мутность и прозрачность воды;

6. Определить цветности воды;

7. Определить вкус и запах воды;

8. Определить общее микробное числа;

9. Провести окраску мазков исследуемой воды;

10. Изучить бактерии на подвижность;

11. Определить число стафилококков.

Определение температуры воды. Следует избегать измерения температуры в местах возможного естественного прогрева воды – на отмелях, в зарослях водных растений и т.п., так как в подобных местах температура обычно значительно превосходит общий температурный фон.

Температура воды определяется непосредственно на водоеме калиброванным термометром с ценой деления 0,1–0,5°С (в отдельных случаях оправдано измерение с ценой деления 1°С). Термометр устанавливают в пробоотборнике, который размещают на выбранной глубине, и выдерживают на нужной глубине не менее 5–10 мин, после чего пробоотборник поднимают и, не вынимая термометр, сразу же определяют температуру.

Температуру поверхностных слоев определяют, опуская термометр на глубину 15–20 см. Температура в поверхностных слоях воды может значительно (на 3– 5°С и более) отличаться от температуры на глубинах в несколько метров. Предметом особого внимания должны быть впадающие в водоем реки, каналы и сточные канавы. При наличии впадающих в водоем притоков (сточных канав, ручьев, рек) определите температуру также в зонах смешения воды в местах их впадения в водоем. При наличии разницы в измеренных температурах в несколько градусов можно говорить о тепловом загрязнении водоема. Погрешность измерения температуры можно свести к минимуму, выполняя следующие правила:

- для измерений используйте только калиброванный термометр;

- измеряйте температуру в разных точках одним и тем же термометром;

- результатом измерения считайте среднее арифметическое нескольких наблюдений.

Мы измеряли температуру на поверхности водоема ртутным термометром в нескольких местах (с понтона в районе садков, ближе к берегу и в отдалении от садков). Средняя температура в водоеме 5,60С.

Определение пенистости воды. Пенистость - способность воды сохранять искусственно созданную пеня. Данный показатель может быть использован для качественной оценки присутствия таких веществ, как детергенты природного и искусственного происхождения. Перелили пробу воды в колбу , объёмом 0.5 л и взбалтывали в течение 30 секунд, пены не образовалось.

Следующий опыт связан с мутностью и прозрачностью воды. Пробы воды отобрали в стеклянные бутылки и закрыли пробками. В этом опыте проверяли воду на мутность, а именно содержанием взвешенных в воде мелкодисперсных примесей. Мутность воды определяют фотометрически, а также визуально – по степени мутности столба высотой 10 -12 см в мутомерной пробирке и пробу описывают качественноследующим образом: прозрачная; слабо опалесцирующая; опалесцирующая; слабо мутная; мутная; очень мутная. Итог опыта : вода слабо мутная (рис. 1).

Рисунок 1. Сравнение мутности исследуемой воды со стандартами.

Определили цветность воды. Цветность является важным физико-химическим показателем качества питьевой воды, от которой зависят ее органолептические свойства. Она обычно обусловлена присутствием окрашенного органического вещества. На цветность воды сильно влияет присутствие железа и других металлов в виде естественных примесей или в качестве продуктов коррозии. Она бывает также обусловлена загрязнением водоисточника промышленными стоками и может служить первым признаком возникновения опасной ситуации.

Цветность воды определяется сравнением с растворами специально приготовленной шкалы цветности и выражается в градусах цветности этой шкалы согласно ГОСТ Р 52769-2007. Вода. Методы определения цветности.

Цветность устанавливают у питьевой и природной воды двумя методами:

1. Метод визуального определения цветности (метод А). Метод применяют только при необходимости ориентировочной оценки цветности;

2. Метод фотометрического определения цветности (метод Б) с применением хром-кобальтовой или платино-кобальтовой шкалы. Методы определения цветности не применяют для анализа воды, содержащей примеси красителей или иных окрашенных химических веществ.

Рисунок 2. Шкала цветности.

Пробу воды отобрали объемом 200 см3 в емкость, изготовленную из стекла и определили визуально применив шкалу цветности. Итог опыта: вода прозрачная, ярко выраженного искусственного цвета нет.

Рисунок 3. Сравнение образца со шкалой цветности.

Определение общего микробного числа. Метод определяет в исследуемой воде общее число микроорганизмов. К общему микробному числу (ОМЧ) относят количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ), способные образовывать на питательном агаре колонии, при температуре 37°С в течение 24 ч (ОМЧ 37°С) и при температуре 22°С в течение 72 ч (ОМЧ 22°С), видимые при увеличении в 2 раза.

При температуре 22°С вырастает больше сапрофитных микроорганизмов, чем при температуре 37°С. Эта разница более выражена при завершении процесса самоочищения (коэффициент соотношения ОМЧ 22°С : ОМЧ 37 °С равен четырем и выше).

Показатель позволяет получать дополнительную информацию о санитарном состоянии водоемов, источниках загрязнения, процессах самоочищения. При производственном контроле исходной воды, поступающей на сооружения водопроводных станций, определяют ОМЧ 37°С с целью установления эффективности очистки и обеззараживания.

Для посева объемов воды, меньших, чем 1 мл, используют разбавления анализируемой воды. Перед посевом растворы для разбавления разливают по 9 мл в пробирки с соблюдением правил стерильности. Затем в первую пробирку с 9 мл раствора вносят 1 мл анализируемой воды. отбирают из нее 1 мл и переносят в чашку Петри, что будет соответствовать посеву 0,1 мл анализируемой воды.

Сразу же после внесения воды в каждую чашку вливают по 8-10 мл (на чашку диаметром 90- 100 мм) расплавленного и охлажденного до 45-46°С питательного агара после фламбирования края посуды, в которой он содержался. Затем быстро смешивают содержимое чашек, равномерно распределяя по всему дну, избегая образования пу- зырьков воздуха, попадания агара на края и крышку чашки. Эту процедуру произво- дят на горизонтальной поверхности, где чашки оставляют до застывания агара.

Делают 4 разбавления и посев с 4 и 3-го разбавления.

Учет результата:

Круглое дно чашки Петри делят на 8 секторов

Подсчитывают число колоний в 4х секторах и находят среднее число.

Затем среднее число в 3м разведении умножают 1000, а число в 4м разведении на 10 000.

Количество колоний на обеих чашках суммируют и делят на два. Результат выражают числом колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 мл исследуемой пробы воды, округляя до 2-3 значимых чисел. Если на одной из 2 чашек подсчет невозможен, результат выдают на основании учета колоний на одной чашке. В протокол анализа заносят результат "число КОЕ ОМЧ 37°С в 1 мл" или "число КОЕ ОМЧ 22 °С в 1 мл"

Рисунок 4. Приготовление разбавлений.

Рисунок 5. Подготовка агара.

Рисунок 6. Подсчет колоний

Органолептический метод определения запаха, вкуса и привкуса воды. Органолептический метод определения запаха, вкуса и привкуса иссле- дуемой воды проводят согласно ГОСТ 3351-74 Вода питьевая. Методы определения вкуса, запаха, цветности и мутности. Органолептическими методами определяют характер и интенсивность запаха. Характер запаха воды определяют ощущением воспринимаемого запаха (землистый, хлорный, нефтепродуктов и др.). Интенсивность запаха воды определяли при температуре 20°С и 60°С, оценили по пятибалльной системе. Определение запаха при 20°С. В колбу с притертой пробкой вместимостью 250 - 350 см3 внесли 100 см3 исследуемой воды температурой 20°С. Колбу закрыли пробкой, содержимое колбы несколько раз перемешали вращательными движениями, колбу открыли и определили характер и интенсивность запаха. Определение запаха при 60°С. В колбу внесли 100 см3 исследуемой воды. Горлышко колбы закрыли часовым стеклом и подогрели на водяной бане до 50 - 60°С. Содержимое колбы несколько раз перемешали вращательными движениями. Сдвигая стекло в сторону, быстро определили характер и интенсивность запаха. Интенсивность, характер и оценку запаха воды определили по этой таблице :

Итог опыта: запах – слегка затхлый, илистый ( 5 баллов); вкус и привкус не измеряли, так как вода не является питьевой.

Окраска бактерий. Окраска по Граму (общепринятая модификация)

Применяется при исследовании на любой вид инфекции. Микроорганизмы в зависимости от результатов окраски делят на две группы: грамположительные (Гр+ ) и грамотрицательные (Гр– ). На фиксированный мазок наносят:

1) полоску фильтровальной бумаги и наливают карболовый генцианвиолет (генциановый фиолетовый). Выдерживают 1-2 минуты, после чего снимают бумажку, сливают краску, промывают водой. При этом все микроорганизмы окрашиваются в фиолетовый цвет;

2) раствор Люголя, выдерживают 1-2 минуты (мазок чернеет), краситель сливают, не промывают. При этом у Гр+ микробов фиксируется фиолетовое окрашивание, т.к. образуется комплексное соединение генцианвиолета с йодом. Под действием спирта этот комплекс не разрушается, и микробы остаются фиолетового цвета;

3) 96% этиловый спирт, выдерживают 30 секунд – 1 минуту. Тщательно промывают мазок. При этом Гр+ остаются фиолетового цвета, а Гр- обесцвечиваются, т.к. не удерживают основной краситель и вымывается спиртом.

4) водный раствор фуксина или сафранина, выдерживают 1-2 минуты и промывают водой. При этом Гр- микробы докрашиваются в красный цвет. Мазок высушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют.

Окраска спор методом Пешкова.

На фиксированный мазок наносят:

1)метиленовый голубой Лёффлера, выдерживают 15-20 сек над пламенем спиртовки и промывают водой.

2)0,5% водный раствор нейтральрота (нейтральный красный), выдерживают 30 сек, промывают водой. Высушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют.

Микроскопическая картина: споры голубые или синие, молодые споры – черно-синие, вегетативные формы – розовые, включения (хроматиновые) - фиолетовые.

Изучение бактерий на подвижность. Некоторые микроорганизмы в живом состоянии способны передвигаться. Различают пассивное (броуновское движение) и активное движение. Пассивное движение (броуновское) осуществляется током среды, в которой находятся микроорганизмы, например, с током воды или воздуха. Активное движение клеток приводится с помощью жгутиков, осущест вляющих вращательные движения. Расположение их на теле микробной клетки раз- личное. Жгутики бывают различной длины. Их диаметр настолько мал, что они не- видимы в световом микроскопе (менее 0,2 мкм). У разных групп бактерий количество и расположение жгутиков неодинаково. Жгутики плохо воспринимают красители. Методы сложной окраски искажают подлинный вид жгутиков, поэтому в лабораториях окраску жгутиков не осуществляют, а исследуют бактерии в живом состоянии. Скорость и характер движения зависят от возраста культуры, окружающей среды и вида микроба. Молодые особи более подвижны, чем старые. С накоплением продуктов жизнедеятельности подвижность микроорганизмов прекращается. Подвижность микроорганизмов один из признаков при определении их вида. Для определения подвижности у бактерий необходимо использовать молодые культуры (12 – 24 часовые), так как старые культуры утрачивают способность пере- двигаться. Исследование проводят путем приготовления препаратов «висячей» или «раздавленной» капли. Метод «висячая капля». Висячую каплю готовят на предметном стекле с углублением (луночкой).

1)Берут чистое предметное стекло с луночкой;

2)Края луночки смазывают тонким слоем вазелина;

3)На покровное стекло наносят каплю исследуемой культуры. Если они выращены в жидкой среде, берут каплю такой культуры, если на плотной, то сначала на покровное стекло наносят каплю изотонического раствора натрия хлорида, а затем в неё культуру микробов; и аккуратно опускают на покровное стекло

4) Предметное стекло проворачивают на 180 кровное так, чтобы капля оказалась в центре углубления, после чего его возвращают в прежнее положение. В таком препарате капля подвешена с внутренней поверхности покровного стекла и находится в герметически закрытой влажной камере. Это позволяет наблюдать за движением микробов в течение длительного времени;

5) Микроскопируют под увеличением ×40, в слегка затемненном поле зрения микроскопа, что увеличивает контрастность неокрашенных форм. Метод «раздавленная капля» служит для кратковременного наблюдения под микроскопом за морфологией и движением живых микробов. 1)Берут чистое предметное стекло;

2)Наносят каплю исследуемой взвеси; 3)Осторожно накрывают покровным стеклом без образования пузырьков воз- духа. Слой жидкости должен быть такой толщины, чтобы стекла склеились. Если покровное стекло плавает, жидкость осторожно впитывают углом кусочка фильтровальной бумаги;

4) Микроскопируют под увеличением ×40, в слегка затемненном поле зрения микроскопа, что увеличивает контрастность неокрашенных форм. Следует иметь в виду, что препарат быстро охлаждается и высыхает.

Итог опыта: после микроскопии подвижности в препаратах не было обнаружено.

Определение числа стафилококков. Определение числа стафилококков проводят методом мембранных фильтров

Пробу в объеме 50 мл фильтруют через 2-3 фильтра с таким расчетом, чтрбы получить изолированные колонии. Фильтры помещают на желточносолевой агар( и инкубируют при температуре 37 °С в течение 24 ч. Подсчитывают блестящие выпуклые колонии белого, палевого, золотистого цвета, окруженные радужной с перламутровым блеском зоной; 96-98 % таких колоний образованы Staphylococcus aureus.

При наличии мелких грамположительных кокков, располагающихся в виде гроздей, и коагулировании плазмы дают положительный ответ. Число колоний стафилококков делят на объем воды, профильтрованной через фильтры, на которых велся учет, и умножают на 100.

Результаты исследований:

1. Исследования воды

   1. Температура воды 5⁰С

   2. Определение пенстости воды – результат отрицательный.

   3. мутность и прозрачность воды около 10 единиц.

   4. Вода прозрачная, определенного, неестественного цвета нет

   5. запах – слегка затхлый, илистый ( 5 баллов); вкус и привкус не измеряли, так как вода не является питьевой.

   6. Определение общего микробного числа

Число КОЕ ОМЧ 37 °С в 1 мл =171

Число КОЕ ОМЧ 22 °С в 1 мл =164

1.  

   1. Окраска бактерий

   2. Изучение бактерий на подвижность – подвижность бактерий не обнаружена.

Библиографический список

1. Вода и водоподготовка. Термины и определения [Текст] : ГОСТ 30813- 2002. – Введ. 2004-01-01. – М. : ИПК Издательство стандартов, 2007

2. Волкова, И. В. Оценка качества воды водоёмов рыбохозяйственного на- значения с помощью гидробионтов[Текст] : / И. В. Волкова, Т. С. Ершова, С. В. Шипулин. – М. : Колос, 2009. – 352с.

3. Ильясова З. З. Санитарная гидробиология : учебное пособие [Текст] : / З. З. Ильясова. – Уфа : Башкирский ГАУ, 2015. – 122 с.

4. Методические указания по санитарно-бактериологической оценке рыбохозяйственных водоемов Утверждаю Заместитель Руководителя Департамента ветеринарии В.В.СЕЛИВЕРСТОВ 27 сентября 1999 г. N 13-4-2/1742 Текст документа по состоянию на июль 2011 года[Электронный ресурс]

Код для цитирования: Скопировать