VII Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2015

Среди многочисленных бактерий, заражающих рыб, Flavobacterium psychrophilum за последние годы вызывает все больший интерес. Этот микроорганизм встречается во всех водных экосистемах мира, чаще всего в пресной воде [1,2].

F. psychrophilum – грамотрицательные палочковидные аэробы 2-5 мкм в длину и 0,3-0,5 мкм в диаметре, с округлыми или заостренными концами. Температурный оптимум находится в пределах 4-12 °С. В лабораторных условиях выращивается при комнатной температуре. На мясо-пептонном агаре дает мажущие колонии R-формы желтого цвета (от кремовых до оранжевых) [1].

Данный возбудитель вызывает холодноводную бактериальную болезнь рыб (bacterial coldwater disease (BCWD)), которую впервые описал Борг в 1948 году. В Европе данное заболевание называют «обжаренный синдром радужной форели» (rainbow trout fry syndrome (RTFS)). Это заболевание встречается во всем мире, преимущественно у лососевых при искусственном выращивании [1].

Заболевание может распространяться как горизонтальным путем, так и вертикальным. Вспышки BCWD возникают, когда температура воды колеблется от 4° до 20°C. Летальность может быть, как очень низкой (1%) и непрерывной, так и достигать 75% при вспышках заболевания. Самый высокий показатель смертности составил 90% у радужной форели, 85% у семги [2].

Первичным очагом инфекции являются жабры и плавники, на которых образуются некротические проявления, также отмечается некроз тканей в области рта. Зараженные рыбы становиться вялыми, брюшная полость часто заполнена жидкостью, наблюдается пучеглазие. В связи с тяжелой анемией жабры, почки и селезенка часто бледные. При хронической форме инфицируется мозг и/или отдельные части позвоночника. F. psychrophilum может вызвать размягчение оболочек икры [1,2].

Вирулентные формы патогенных бактерий F. psychrophilum вызывают эпизоотии и массовую гибель рыб, при неблагоприятных или стрессовых условиях, а также способствуют повышению восприимчивости гидробионтов к инфекциям и усиливают приспособляемость бактерий [1,2].

Цель и задачи.

Цель работы: изучить биохимические свойства и антибтотикоустойчивость F. psychrophilum, для создания диагностической методики.

Задачи:

• Изучит рост штаммов F. psychrophilum на дифференциальных средах.

• Изучить антибиотикоустойчивость штаммов F. psychrophilum диско-диффузным методом.

Материалы и методы.

В ходе работы использовались среды Гисса, среда Клиглера с мочевиной, среда Олькеницкого,бумажные диски для диффузного метода исследования антибиотикоустоичовости производства НЦиФ [5]. В работе использовалась культура штаммов 570, 16, 18, полученных из музея кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ВСЭ УГСХА им. П.А. Столыпина, выращенных на полужидком агаре.

При изучении антибиотикоустоичовости, использовалась суточная культура, выращенная в пробирках на МПБ. Полученная суспензия, объемом 1 мл. переносилась на МПА для получения газона, выдерживалась 10 минут для осаждения бактерий, излишек МПБ убирался при помощи стерильных пипеток. Далее чашки подсушивались в термостате и на них помещались бумажные диски.

Во всех исследованиях чашки выдерживались при средней температуре 23⁰С, снятие результатов проводилось каждые 24 часа в течении 3 суток.

Результаты исследований и обсуждение.

Таблица 1 – Биохимические свойства штаммов F.psychrophilum

Свойства	Штаммы F.psychrophilum:
	16	18	570
Глюкоза	-	+	-
Ксилоза	-	+	+
Манноза	-	-	-
Рафиноза	-	-	-
Мальтоза	-	+	-
Лактоза	-	-	-
Сахароза	-	-	-
Рамноза	-	+	+
Дульцит	-	-	-
Сорбит	-	-	-
Инозин	-	-	-
Мочевина	+	+	+
H2S	-	-	-

Одним из биохимических свойств F. psychrophilum является способность утилизировать мочевину. Результаты исследования биохимических свойств штаммов F. psychrophilum представлены в таблице 1.

Таблица 2 – Антибиотикоустойчивость штаммов F. psychrophilum

Антибактери альные препараты	Содержание в диске, мкг	Диаметр зон подавления роста, мм
		Штаммы Flavobacterium psychrophilum
		16	18	570
В-лактамные пенициллины
Ампициллин	10	-	-	-
Бензилпенициллин	10	-	-	-
Карбенициллин	100	17	10	15
В –лактамные цефалоспорины
Цефоперазон	75	15	16	-
Цефаклор	30	-	-	-
Природные макролиды
Эритромицин	----	-	-	-
Полусинтетические макролиды
Кларитромицин	15	-	-	-
Тетрациклины
Доксициклин	30	19	20	21
Аминогликозиды
Стрептомицин	30	10	15	17
Канамицин	30	11	16	18
Левомицетины (синтет. Аналоги хлорамфеникола)
Левомицитин	30	21	23	21
Линкозаимды
Линкомицин	2	-	-	-
Фторхинолоны
Офлоксацин	5	22	21	20
Энрофлоксацин	5	21	24	5
Норфлоксацин	10	18	10	21
Производные нитрофуранов
Фурадонин	300	-	-	-
Фурагин	300	-	-	-
Полимиксиновая группа
Полимиксин	----	18	21	18
Прочие
Оптохин	----	-	-	-

Примечания: «-» отсутствие зоны задержки роста.

В процессе исследований было выяснено, что изучаемые штаммы F. psychrophilum не чувствительны к антимикробным препаратам группы нитрофуранов и В-лактамных пенициллинам (за исключением карбеницилина), но высоко чувствительны к фторхинолам. Результаты исследования представлены в таблице 2.

Выводы.

В ходе работ были исследованы биохимические свойства штаммов F. psychrophilum, выяснена их способность к росту на среде с добавлением мочевины. Исследованные штаммы F. psychrophilum не чувствительны к антимикробным препаратам группы нитрофуранов и В-лактамных пенициллинов (за исключением карбеницилина), но высоко чувствительны к фторхинолам.

Список литературы.

1. Парамонова, Н.А. Об актуальности и практической значимости изучения Flavobacterium psychrophilum / Н.А. Парамонова, Д.А. Викторов, Д.А. Васильев // Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения: Материалы IV международной научно-практической конференции, Ульяновск, 22-24 ноября 2012. – Т. 1. – С. 303-306.

2. Парамонова, Н.А. Роль бактерий Flavobacterium psychrophilum в патогенезе рыб / Н.А. Парамонова, Д.А. Викторов, Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин // Биотехнология: реальность и перспективы в сельском хозяйстве: Материалы Международной научно-практической конференции, Саратов, ФГБОУ ВПО «Саратовский ГАУ», 28-29 января 2013. – Саратов: Издательство «КУБиК», 2013. – С. 93-95.

3. Викторов Д.А. Результаты изучения биохимических свойств Flavobacteriumpsychrophilum / Д.А. Викторов, А.П. Воротников, Н.А. Парамонова, Д.А. Васильев // Международный научно-исследовательский журнал = Research journal of international studies. – Екатеринбург: «Индивидуальный предприниматель Соколова Марина Владимировна», 2014. – № 2-1 (21). – С. 53-54.

4. Гринева Т.А. Биопрепараты бактериофагов для лечения и профилактики бактериальных болезней рыб / Т.А. Гринева, Д.А. Викторов, И.Г. Горшков, Н.Г. Куклина, Е.Г. Логинова, Д.А. Васильев // Биотехнология. Взгляд в будущее: Материалы III Международной научной Интернет-конференции, Казань, 25-26 марта 2014. – Т. 1. – С. 53-57.

5. МУК 4.2.1890-04 Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам.

Код для цитирования: Скопировать