VII Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2015

The materials on the development of analytical methods for paracetamol using a spectrometric technique in the pharmaceutical substance, medicinal forms and biological liquids are presented in the paper.

Среди лекарственных средств, обладающих жаропонижающим действием, парацетамол занимает ведущее место. Кроме того, он оказывает анальгетический эффект и применяется как самостоятельно, так и в сочетании с другими средствами при невралгиях, головной боли, простудных заболеваниях. Парацетамол входит в состав многих лекарственных препаратов, выпускаемых в разнообразных формах: порошки («Колдрекс», «Фервекс» для детей и взрослых, «Терафлю» от гриппа и простуды), таблетки («Панадол», «Пенталгин Плюс», «Ринза» и др.), свечи («Цефекон» для детей, «Эффералган» и др.), капсулы («Солпадеин»), суспензии («Детский Панадол»)[ 3 ]. Все эти препараты можно приобрести без рецепта врача. Кроме того, в аптеках в свободной продаже имеется парацетамол в виде таблеток.

Однако при передозировке возможно поражение печени, а иногда и почек. К приему этого лекарства следует с осторожностью относиться пациентам с выраженным астматическим компонентом.

Для установления факта отравления и правильного выбора метода детоксикации необходима разработка экспресс-методики количественного определения парацетамола в биологических жидкостях, в частности в моче.

Для количественного определения парацетамола фармакопейная статья ГФ XII издания рекомендуют метод нитритометрии с внешним индикатором (йодкрахмальная бумага) после кислотного гидролиза субстанции в течение одного часа, что связано с большими временными затратами [ 2 ].

Таким образом, актуальной является разработка экспрессной методики количественного определения данного лекарственного средства в субстанции, обладающей высокой чувствительностью. Она позволит провести количественное определение парацетамола не только в лекарственных формах, но и в биологических жидкостях организма человека (кровь, моча), что необходимо при химико-токсикологических исследованиях.

Целью работы является разработка унифицированной валидизированной методики количественного определения парацетамола в фармацевтической субстанции, лекарственных формах и биологических объектах.

Наличие фенольного гидроксила в структуре парацетамола указывает на возможность последнего вступать в реакции азосочетания с солями диазония с образованием азокрасителя, что и было использовано нами в настоящем исследовании.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Установить количественное соотношение реагирующих веществ (парацетамола и диазореактива);

2. Осуществить выбор рабочей длинны волны;

3. Установить время устойчивости окраски азокрасителя;

4. Определить чувствительность реакции с целью возможности использования ее при химико-токсикологических исследованиях;

5. Определить диапазон подчинения продукта реакции основному закону светопоглощения;

6. Провести количественное определение парацетамола в фармацевтической субстанции, лекарственных формах и биологических жидкостях.

В основе спектрофотометрического метода количественного определения в видимой области использована реакция спиртового раствора парацетамола с диазотированной сульфаниловой кислотой в кислой среде.

Материалы и методы

Все исследования проводили на фотометре КФК-3 в кюветах с толщиной оптического слоя 10мм при комнатной температуре.

В анализе использовали рабочий стандартный образец (РСО) парацетамола (ФС 42-0268-07).

Статистическую обработку экспериментальных данных исследований (р = 95%) проводили с помощью программ StatSoft Statistica 6,0 Microsoft Excel с вычислением граничных значений доверительного интервала среднего результата и определением ошибки единичного определения [1].

Результаты и их обсуждение

Установлено, что взаимодействие парацетамола с диазотированной сульфаниловой кислотой происходит в стехиометрических соотношениях 1:1.

Для выбора рабочей длины волны готовили спиртовой раствор парацетамола с концентрацией 0,0002г/мл. По истечении 5 минут измеряли оптическую плотность окрашенного продукта реакции при разных длинах волн, относящихся к видимой области спектра (380нм -780нм).

Спектр поглощения спиртового раствора парацетамола в видимой области имеет максимум при длине волны 565 нм. При той же длине волны проводили измерения оптической плотности испытуемых растворов и растворов сравнения.

Результаты определения устойчивости окраски во времени показали ее устойчивость в течение 30 минут.

Проведенные исследования по выявлению линейной зависимости между концентрацией парацетамола и оптической плотностью продукта его реакции с диазореактивом показали, что подчинение закону Бугера-Ламберта – Бера наблюдается в диапазоне концентраций от 0,0001г/мл до 0,004 г/мл.

Относительная погрешность определения находилась в пределах точности спектрофотометрического анализа.

Минимальная концентрация парацетамола, определяемая по этой методике, составляет 0,0001 г/мл, что свидетельствует о возможности ее применения не только для анализа фармацевтических препаратов, но и для определения парацетамола в биологических объектах.

Следующим этапом исследования явилось определение содержания парацетамола в фармацевтической субстанции и лекарственной форме. Определение проводили в сравнительном аспекте с раствором стандартного образца, поскольку данный метод определения является более точным, надежным и отвечает требованиям Государственной Фармакопеи XII издания. Полученные результаты укладываются в нормы допустимых отклонений: для субстанции ε _a = 100,02 ± 1,25; для таблеток парацетамола 0,5 г -ε _a = 0,495 ± 0,19.

Валидация методики показала, что данная методика не отягощена грубой и системной ошибкой, является правильной и позволяет получить воспроизводимые результаты.

Разработанная методика была применена в химико-токсикологическом исследовании парацетамола в моче в качестве биологической жидкости [4].

Были изучены условия экстракции парацетамола из водных растворов с целью их использования при разработке оптимальной методики изолирования определяемого вещества из мочи. Установлено, что максимальное количество парацетамола экстрагируется эфиром при рН=7,5, в присутствии натрия хлорида в качестве электролита. Оптимальной оказалась двукратная экстракция по 5 минут.

Для приготовления модельной смеси использовали образец мочи, полученный от здорового добровольца. При этом в течении месяца до отбора проб человек не принимал лекарств. Модельные смеси мочи готовили путем добавления к ней определенного объема стандартного спиртового раствора парацетамола с концентрацией 0,0002 г/мл. Приготовленные смеси выдерживали в течении 24 часов при комнатной температуре. Экстракцию парацетамола проводили с соблюдением условий, разработанных для водных растворов определяемого вещества. Сухой остаток, полученный после испарения эфира, исследовали спектрофотометрическим методом в видимой области по методике, разработанной для фармацевтической субстанции исследуемого лекарственного средства.

Выводы

Разработана методика количественного определения парацетамола в фармацевтической субстанции и лекарственной форме спектрофотометрическим методом в видимой области спектра. Показана возможность использования данной методики в дальнейших химико-токсикологических исследованиях.

Литература

1. Государственная фармакопея XI издания. – М.:Медицина, 1987.– Вып.1. –– 334с.

2. Государственная фармакопея Российской Федерации. – 12-е изд. – М.: Научный центр экспертизы средств медицинского применения, 2008. – 704 с.

3. Машковский М.Д. Лекарственные средств/ М.Д.Машковский. – 15-е изд., перераб., испр. и доп. – М.: РИА «Новая волна». 2007. – 1206 с.

4. Фланаган Р. Дж. Основы аналитической токсикологии/ Р. Дж. Фланаган [ и др.]. – М.: Медицина, 1997. – С. 363

Код для цитирования: Скопировать