VII Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2015

Введение

Одним из распространенных растений на Южном Урале является кровохлебка лекарственная (Sanguisorba officinalis L.), семейство Розоцветные (Rosaceae) и обладает широким фитоценотическим спектром. Она произрастает на разреженных лесах, на суходольных лугах, среди кустарников, по берегам рек и озер и на остепненных склонах холмов [2]. Встречается кровохлебка лекарственная почти по всей Оренбургской области, образуя небольшие заросли [7]. Главной группой биологически активных веществ которой, являются дубильные вещества (ДВ), обуславливающие вяжущее, противомикробное и кровоостанавливающее действие галеновых препаратов на её основе.

Высокое содержание дубильных веществ, а так же достаточная сырьевая база, делают данное лекарственное растительное сырье (ЛРС) ценным в качестве источника для получения дубильных веществ. Эти аспекты определили выбор ЛРС кровохлебки лекарственной в качестве объекта исследования.

Целью настоящей работы явилсяанализ содержания дубильных веществ в корневище и корнях кровохлебки лекарственной (Sanguisorba officinalis), заготовленной в Оренбургской области в период плодоношения (август – сентябрь).

Материалы и методы

Объектами исследования явились корневище и корни кровохлебки лекарственной (Sanguisorba officinalis), заготовленные в Оренбургской облас-ти (Красногвардейский, Оренбургский, Новосергиевский и Пономарёвский районы).

Для проведения качественного анализа дубильных веществ (ДВ) из лекарственного растительного сырья готовили водные извлечения по следующей методике. Навеску сырья 2,0 г помещали в колбу и добавляли 250,0 мл воды очищенной. Экстрагировали при умеренном кипячении в течение 30 мин. Полученное извлечение охлаждали и проводили качественные реакции [3,8].

Количественное определение проводили спектрофотометрическим и перманганатометрическим методами.

1. Перманганатометрическое определение дубильных веществ [1].

Около 2 г (точная навеска) измельченного сырья, просеянного сквозь сито с диаметром отверстий 3мм, помещают в коническую колбу вместимостью 500 мл, заливают 250 мл нагретой до кипения воды и кипятят с обратным холодильником на электрической плитке с закрытой спиралью в течение 30 мин при периодическом перемешивании. Жидкость охлаждают до комнатной температуры и процеживают около 100 мл в коническую колбу вместимостью 200-250 мл через вату так, чтобы частицы сырья не попали в колбу.

Затем отбирают пипеткой 25 мл полученного извлечения в другую коническую колбу, прибавляли 500 мл воды, 25 мл индигосульфокислоты и тировали при постоянном перемешивании 0,02 М раствором калия перманганата до золотисто-желтого окрашивания. Параллельно проводили контрольный опыт.

Содержание дубильных веществ (Х) в процентах в пересчете на абсолютное сухое сырье вычисляют по формуле:

Х = V-V1 * 0.004157* 250* 100* 0100m* 25* (100-W)

где V – объем раствора перманганата калия (0,02 моль/ л), израсходованного на титрование извлечения, в миллилитрах; V₁ – объем раствора перманганата калия (0,02 моль/ л), израсходованного на титрование в контрольном опыте, в миллилитрах; 0,004157 – количество дубильных веществ, соответствующее 1 мл раствора перманганата калия (0,02 моль/ л), (в пересчете на танин), в граммах; m – масса сырья в граммах; W – потеря в массе при высушивании сырья в процентах; 250 – общий объем извлечения в миллилитрах; 25 – объем извлечения, взятого для титрования, в миллилитрах.

2. Спектрофотометрическое определение дубильных веществ [5].

Около 0,8 г (точная навеска) измельченного до размера частиц 2 мм сырья заливали 100 мл воды и нагрели на кипящей водяной бане в течение 30 мин с последующим 30-минутным отстаивание при комнатной температуре. Полученное извлечение фильтровали через складчатый бумажный фильтр в мерную колбу емкостью 100 мл, доводили водой до метки.

5 мл полученного извлечения помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводили до метки спиртом этиловым 70%, 2,5 мл полученного извлечения помещали в мерную колбу на 25 мл и доводили до метки спиртом этиловым 70%. Измеряли оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре «GENESYS 5» в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны от 274,5 до 277,5 нм относительно спирта этилового 70%. Параллельно измеряли оптическую плотность раствора стандартного образца танина.

Примечание. Приготовление раствора стандартного образца танина. Около 0.0025 г (точная навеска) стандартного образца танина, высушенного до постоянной массы при температуре 100-150 °С, помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводили спиртом этиловым 70% до метки, 2,5 мл полученного разведения помещали в мерную колбу на 25 мл и доводили до метки спиртом этиловым 70%.

Содержание дубильных веществ в пересчете на воздушно-сухое сырье (Х,%) определяли по формуле:

Х = Dx * Mст* 100 * 50 * 25 * 2,5 * 100 Dст * Mx * 5 * 2,5 * 50 * 25

где М_ст – масса танина, г; М_х – масса сырья, г; D_ст – оптическая плотность раствора стандартного образца танина; D_х – оптическая плотность исследуемого раствора.

Математическую обработку проводили с использованием программы Microsoft Excel 2010.

Результаты и их обсуждение

Качественный анализ установил, что дубильные вещества были обнаружены во всех анализируемых образцах лекарственного растительного сырья, при этом было установлено, что выделенные ДВ имели преимущественно гидролизуемую природу (табл.1).

Таблица 1.

Результаты качественных реакций на дубильные вещества в извлечении корневищ и корней кровохлебки лекарственной

Реактив	Эффект реакции
1%-ный раствор желатина	Муть, исчезающая при добавлении раствора желатина
Железоаммониевые квасцы	Чёрно – синее окрашивание
NaNO3	Коричневое окрашивание

Спектрофотометрический метод количественного определения дубильных веществ в корнях и корневище кровохлебки лекарственной показал, что наибольшее содержание дубильных веществ обнаружено в лекарственном растительном сырье, собранном в Оренбургском районе (23,28±0,31%), а в ЛРС, заготовленном в Новосергиевском районе содержание ДВ в 1,1 раза меньше (21,16±0,48%), в Красногвардейском - в 1,26 раз меньше (18,44±0,28%) и в Пономарёвском - в 1,2 раза меньше (19,47±0,65%) (табл. 2).

Таблица 2.

Метрологическая характеристика метода

Спектрофотометрический метод
Районы		x		Sx	∆x	E%
Оренбургский	5	23,28	0,69	0,31	0,86	2,96
Красногвардейский	5	18,44	0,40	0,18	0,50	2,17
Пономаревский	5	19,47	0,50	0,22	0,61	2,57
Новосергиевский	5	21,16	0,68	0,30	0,83	3,21

Перманганатометрический метод количественного определения дубильных веществ в корнях и корневище кровохлебки лекарственной показал, что наибольшее содержание дубильных веществ обнаружено в лекарственном растительном сырье, собранном в Оренбургском районе (31,30±0,26%), а в ЛРС, заготовленном в Новосергиевском районе содержание ДВ в 1,09 раза меньше (28,83±0,48%), в Красногвардейском - в 1,13 раз меньше (27,70±0,40%) и в Пономарёвском - в 1,15 раза меньше (27,18±0,23%) (табл. 3).

Таблица 3.

Метрологические характеристики метода

Перманганатометрический метод
Районы		x		Sx	∆x	E%
Оренбургский	5	31,30	0,59	0,26	0,72	1,99
Красногвардейский	5	27,7	0,89	0,4	1,10	3,21
Пономаревский	5	27,18	0,51	0,23	0,63	1,90
Новосергиевский	5	28,83	0,96	0,43	1,18	3,33

Данные статистической обработки показали, что использованные методики характеризуются приемлемой относительной погрешностью. Сравнение по критерию Фишера (F), показывает незначимое различие дисперсий, так как F_{рассчитанное} меньше, чем F_{табличное}. Тогда как, сравнение по t-критерию выявило значимое различие результатов перманганатометрического и спектрофотометрического методов количественного определения (табл. 4).

Таблица 4.

Сравнение методов определения дубильных веществ

Район	Fрассчитанное	Fтабличное	t	tтабличное
Оренбургский	1,37	15,98	15,84	2,26
Красногвардейский	4,95	15,98	18,28	2,26
Пономарёвский	1,04	15,98	12,18	2,26
Новосергиевский	1,99	15,98	13,46	2,26

Метод перманганатометрии показал завышенные результаты в определении дубильных веществ, которые могут быть обусловлены следующими факторами: трудность фиксации конечной точки титрования, возможность окисления перманганатом калия других фенольных соединений, зависимость результатов от скорости перемешивания титруемого раствора и освещения. Кроме того, недостатком данной методики является необходимость предварительной стандартизации титранта и проведение контрольного опыта [6].

Обобщая полученные результаты, можно отметить, что максимальное содержание дубильных веществ обнаружено в лекарственном растительном сырье (ЛРС), собранном в Оренбургском районе, а минимальное – в ЛРС, заготовленном в Красногвардейском районе Оренбургской области. Это может быть связано с экологическими и онтогенетическими закономерностями динамики накопления дубильных веществ. Так как известно, что наибольшее содержание суммы дубильных веществ в корневищах с корнями кровохлебки отмечается у растений, произрастающих в условиях достаточного увлажнения и освещенности на открытых лугах и лесных полянах. Такими благоприятными условиями для накопления дубильных веществ и характеризуются выбранные районы Оренбургской области.

Список литературы

1.	Государственная фармакопея СССР XI. Выпуск I. С. 286-287.
2.	Казеева А.В., Пупыкина К.А. Оценка содержания дубильных веществ в сырье кровохлебки лекарственной, собранной в различных районах Башкортостана. Башкирский химический журнал. 2014. Том 21. № 3. С. 121-123.
3	Куркин В.А. ФАРМАКОГНОЗИЯ: Учебник для студентов фармацевтических вузов. – Самара: ООО «Офорт», ГОУВПО «СамГМУ», 2004. 1180 с.
4.	Мальцева А.А. Количественное определение дубильных веществ в траве горца почечуйного / А.А. Мальцева, А.С. Чистякова, А.А. Сорокина // ВЕСТНИК ВГУ, СЕРИЯ: ХИМИЯ. БИОЛОГИЯ. ФАРМАЦИЯ. 2013. №2. С. 203-205.
5.	Разарёнова К.Н., Жохова Е.В. Сравнительная оценка содержания дубильных веществ в некоторых видах рода Geranium L. флоры северо-запада. Химия растительного сырья. 2011. №4. С. 187-192.
6.	Рудакова Ю.Г., Дмитриев А.Б. Содержание дубильных веществ в спиртовом извлечении травы Дубровника Белого и определение его антиоксидантной активности. Химия растительного сырья. 2014. № 1. С. 203-208.
7.	Cаньков А.Н. Лекарственные травы Оренбуржья: монография. – Оренбург, 2001. 349 с.
8.	Федосеева Л.М. Изучение дубильных веществ подземных и надземных вегетативных органов бадана толстолистного, произрастающего на Алтае. // Химия растительного сырья. 2005. № 3. С. 45-50.

Код для цитирования: Скопировать