VII Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум - 2015

Классическая чума свиней (КЧС) – высококонтагиозная вирусная болезнь, характеризующаяся лихорадкой, поражением кровеносной и кроветворной систем, крупозным воспалением легких и крупозно-дифтеритическим воспалением толстого кишечника [1].

Болезнь встречается более чем в 60 странах на всех континентах (за исключением США, Канады, Австралии, Скандинавских стран). Более других от этой инфекции страдают страны Европы, Азии, Южной и Центральной Америки, где хорошо развито свиноводство. Классическая чума свиней относится к списку А особо опасных инфекций и наносит большой экономический ущерб свиноводству как в развивающихся, так и в развитых странах с хорошо организованным ветеринарно-санитарным надзором [2]. В связи с вышеизложенным, разработка современных методов диагностики является актуальной проблемой современной науки и практики.

Лабораторная диагностика КЧС основывается на выявлении вирусного антигена, специфических антител, обнаружении вирусного генома и выделении вируса [5].

Обнаружение вирусной нуклеиновой кислоты. Методы ПЦР и ДНК-зонда позволяют дифференцировать пестивирусы (КЧС и вирусы диареи КРС) [1].

ПЦР. Выделяют рибонуклеиновую кислоту из образцов тканей животных фенольным методом, подвергают обратной транскрипции и амплифицируют [1].

Метод ДНК-зондов. В качестве гибридизационного зонда используют копмлементарную ДНК к участку гена белка Pl 25, меченную ³²Р [1].

Обнаружение вирусного антигена (белка).

РИФ. Из лейкоцитарного концентрата проб крови больных или подозрительных по заболеванию животных, а также костного мозга грудной кости делают маз­ки, а из органов - срезы [1]. Специфиче­ское свечение в цитоплазме указывает на наличие вируса КЧС. В контрольных пре­паратах подобного свечения не должно быть [4].

РНГА с антительным эритроцитарным диагностикумом. Вирус считается обнаруженным при наличии гемагглютинации в суспензии из патологического материала в разведениях не менее чем 1:8 [1].

ИФА. В иммуноферментных конъюгатах используют иммуноглобулины баранов, инфицированных ВКЧС. Метод позволяет при постмортальной диагностике выявлять вирус со 100%-ной эффек­тивностью без биологического накопления [1].

РДП слабочувствительна, дает положительный результат в 50 % случаев [1].

РИОЭФ (реакция иммуноэлектроосмофореза), в которой антигены и антитела движутся строго навстречу друг другу под действием электрического поля. РИЭОФ значительно чувствительнее, чем РДП, и скорее (за 30 мин) выявляет вирус в мезентериальных лимфоузлах и суспензии ткани поджелудочной железы [1].

Обнаружение вируса биопробой. Биопробу при диагностике ставят в сомнительных случаях. Из благополучного по инфекционным болезням хозяйства берут иммунизированных и неиммунизированных против КЧС поросят в возрасте 2-3 мес. массой 20-30 кг. В качестве материала для заражения используют 10%-ную суспензию органов (селезенки, лимфоузлов, костного мозга) или кровь от павших животных. Материал вводят подкожно. Диагноз на КЧС считают установленным, если неиммунизированные животные на 2–5-й день заболевают и в течение 7–10 дней погибают, а иммунизированные остаются здоровыми[1].

Выделение вируса в культуре клеток. Выделение вируса проводят на перевиваемой линии культуры клеток РК-15 (почки поросенка), выращенной на покровных стеклах в пробирках. Вирус КЧС в культуре РК-15 не вызывает ЦПД; поэтому индикацию его проводят с помощью серологических реакций РИФ и РНГА [1].

Гистологические исследования. Проводят с целью обнаружения специфических изменений нервных тканей. От павших или убитых свиней берут полушария головного мозга, мозжечка, аммоновых рогов, спинного мозга в различных участках. Препараты окрашивают гематоксилин-эозином. В большинстве случаев (70-93%) в ЦНС об­наруживают негнойный лимфоцитарный энцефаломиелит. В срезах, приготовленных из лим­фоузлов, сердечной мышцы и печени, можно обнаружить присутствие ацидофильных внут­риядерных телец-включений, несколько меньших, чем ядрышки [4].

Ретроспективная серологическая диагностика. В настоящее время в лабораторной диагностике КЧС используются три метода обнару­жения специфических антител к ВКЧС:

непрямой метод РИФ [1]. Используют зараженные вирусом перевиваемые клетки (РК-15) на стек­лышках. Титром AT к КЧС считают последнее разведение сыворотки, обеспечивающее зеленое свечение (на 2 креста) диффузного цитоплазматического АГ виру­са при отсутствии подобного свечения в контролях [4].

Реакция нейтрализации (РН) в сочетании с РИФ. Ставят в культуре клеток РК-15, выращен­ной на покровных стеклах в пробирках. Учет реакции проводят через 48 ч. Присутствие вируса обнаруживают в люминесцентном микроскопе [1]. От­сутствие флюоресцирующих микробляшек (при наличии их в контроле вируса) в препаратах ВКЧС указывает на наличие в ма­териалах специфических AT. Титром AT считают то предельное разведение сыворотки, при котором наблюдается полное подавление образования флюоресцирующих микробляшек [4].

ИФА в непрямой модификации. На миллипоровские фильтры, смоченные раствором АГ ВКЧС, наносят свиные сыво­ротки. Затем фильтры инкубируют в растворе кроличьего IgG (против IgG свиньи), меченого пероксидазой хрена. Опытные образцы окрашиваются в коричневый цвет, контрольные остаются бесцветными [4].

К ВКЧС восприимчивы свиньи всех пород и возрастных групп, особенно чистопородные, а также дикие кабаны [4]. Болезнь возникает в любое время года, протекает в виде эпизоотии [3].

Очень важно своевременно провести лабораторную диагностику классической чумы свиней, поскольку смертность достигает от 80 до 100 % [3].

Библиографический список

1. Белоусова, Р.В. Ветеринарная вирусология: учебник / Р.В. Белоусова, Э.А. Преображенская, И. В. Третьякова. – М.: КолосС, 2007. – 424 с.

2. Бессарабов, Б.Ф. Инфекционные болезни животных: учебник / Б.Ф. Бессарабов, А.А. Вашутин, Е.С. Воронин. – М.: КолосС, 2007. – 671 с.

3. Госманов, Р.Г. Ветеринарная вирусология: учебник / Р.Г. Госманов, Н. М. Колычев. – М.: КолосС, 2006. – 304 с.

4. Сюрин, В.Н. Вирусные болезни животных: учебник / В.Н. Сюрин, А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьёв, Н.В. Фомина. – Москва: ВНИТИБП. – 928 с.

5. Wenswoort, G. Topographical and functional mapping of epitopes on hog cholera virus wich monoclonal antibodies // J. gen. Virol. – 1989. – V. 70. – P. 2865-2876.

Код для цитирования: Скопировать